Možnosti laboratórnej diagnostiky pertussis.

Transcription

1 Možnosti laboratórnej diagnostiky pertussis. Odporúčania EU Pertstrain group. Maďarová L., Klement C., Bottková E., Avdičová M., Morihládková V. RÚVZ BB, Odbor lekárskej mikrobiológie, NRC pre pertussis a parapertussis, Cesta k nemocnici 25, Banská Bystrica

2 ochorenie preventabilné očkovaním Slovensko - vakcinácia od roku 1959 rok zmena celulárnej vakcíny na acelulárnu rok booster v 13. roku života (poliomyelitída, tetanus, záškrt) NRC zriadené 15. októbra 1994 Pertussis človek - jediný zdroj B. pertussis pertussis adept na elimináciu?! WHO plán do roku 2000 znížiť incidenciu pertussis pod 0,1/ obyvateľov ALE: v súčasnosti stúpa incidencia ochorení vo všetkých vekových skupinách, na celom svete Je B. pertussis úspešnou baktériou? medpedia.framar.bg

3 Pertussis celosvetový problém musee-afrappier.qc.ca Čierny kašeľ (divý kašeľ; stodenný kašeľ) Oslovski kašelj (PL) Whooping cough (GB) Coqueluche (FR) Keuchhusten (D) Коклюш (RU) Pertosse (IT) Hinkuyskä (FI) Kikhosta (SV) celosvetový problém, epidémie- Holandsko, Taliansko, Francúzsko, Fínsko, Poľsko, Anglicko, Kanada, Argentína, USA, Tajwan, Austrália, Švédsko pozornosť sa sústreďuje na vakcináciu- zmena vakcíny, vyvanutie imunity (booster), shift v genóme divého kmeňa (PFGE- príbuznosť resp. odlišnosť kmeňov) Slovensko- projekt EUVAC.NET, zosúladenie diagnostiky (sérologickej, MB+PFGE) nevyhnutnosť surveillance výskytu pertussis nielen pomocou real-time PCR ale aj pomocou kultivácie s následnou analýzou jednotlivých izolátov pomocou PFGE

4 Laboratórna diagnostika B. pertussis

5 Z nedávno publikovaných záverov skupiny reprezentujúcej 12 európskych referenčných centier resp. laboratórií, EU Pertstrain Group, vyplývajú dôležité a zásadné pravidlá týkajúce sa diagnostiky tohto agens: Od Odporúčania EU Pertstrain group 1. Odporučenie pre odber vzoriek na vyšetrenie pertussis u suspektných prípadov 2. Diagnostika pertussis pomocou sérologických metód dôkazu 3. Interpretácia výsledkov vyšetrení získaných pomocou ELISA metód dôkazu Guiso, N., Berbers, G., Fry, N.K., He, Q., Riffelmann, M., Wirsing von Knig, C. H., EU Pertstrain group. What to do and what not to do in serological diagnosis of pertussis: recommendations from EU reference laboratories. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2011; 30(3):

6 1.Odporučenie pre odber vzoriek na vyšetrenie pertussis u suspektných prípadov p 1. U novorodencov: odbery výterov z nosohltana - real-time PCR a kultivácia; čo najskôr po prejavení sa prvých symptómov ochorenia. 2. U očkovaných detí a dospelých, pokiaľ kašeľ trvá menej ako dva týždne: odbery na kultiváciu a real-time PCR. 3. Dôkaz protilátok triedy IgG anti PT: význam u starších detí a dospelých, vrátane rodičov a všetkých členov domácnosti. 4. Pokiaľ kašeľ trvá dva až tri týždne: niejestanovenieiggantiptzjednej vzorky dostatočným dôkazom ochorenia. 5. U adolescentov a dospelých s kašľom trvajúcim dlhšie ako 3 týždne: odber z nosohltana na real-time PCR a stanovenie IgG anti PT. Budúci rodičia Starí rodičia Súrodenci Rodičia

7 2. Diagnostika pertussis pomocou sérologických metód dôkazu 1. PreELISAtestyjepotrebnépoužívať ako antigén purifikovaný nedetoxifikovaný pertussický toxín (PT). 2. Najlepšia senzitivita a zároveň špecificita je dosiahnutá stanovením protilátok triedy IgG proti PT. 3. Sérologická diagnostika by mala byť dvojvzorková, nakoľko interpretácia takto získaných výsledkov je presnejšia a spoľahlivejšia. 4. V prípade jednovzorkovej sérológie Anti-PT IgG je potrebné využívať jednu alebo dve cutoff. 5. Stanovenie protilátok IgA anti PT používať len v prípade, že stanovenie IgG anti PT je nejasné resp. nie je možné získať druhú, párovú, vzorku séra. 6. Nepoužívať ť ostatné t pertussisové antigény na rutinnú diagnostiku tohto agens, nie sú dostatočne špecifické. 7. Neodporúča sa používanie ELISA kitov s viacerými pertussisovými antigénmi. 8. Nasledujúce laboratórne metódy sa nemajú využívať v rutinnej diagnostike: mikroaglutinácia (nízka citlivosť; môže byť použitá na imunologické prehľady,niejevšak vhodná na potvrdenie klinickej diagnózy) imunoblot (nie je možná kvantifikácia) KFR (nízka citlivosť a špecificita) nepriama imunofluorescencia (nízka citlivosť a špecificita)

8 3. Interpretácia výsledkov vyšetrení získaných pomocou ELISA metód dôkazu 1. PT aj FHA (aj iné antigény využívané v ELISA testoch) - súčasť acelulárnych vakcín interpretácia hladín protilátok u nedávno očkovaných osôb je náročná; správna a valídna interpretácia testov možná až rok po očkovaní!!! 2. Dvojvzorková sérológia, pomocou ELISA metód dôkazu Anti-PT IgG, založená na 100% náraste koncentrácie protilátok alebo na 50% poklese koncentrácie protilátok je špecifickou a citlivou sérologickou diagnostikou. 3. Pre jednovzorkovú sérológiu nie sú zadefinované hodnoty cut-off pre Slovenskú republiku, nakoľko neboli vykonané zatiaľ žiadne imunologické prehľady v našich podmienkach!!! POZIT??? a či NEGAT???

9 Dostupné referenčné hodnoty z EU referenčných laboratórií a z literatúry. Tab. 1:Vekovo závislé referenčné hodnoty koncentrácií protilátok podľa súčasnej literatúry a odporúčaní EU referenčných laboratórií pre pertussis (1,2, 3). Protilátky Vekovo závislé referenčné hodnoty koncentrácie protilátok IU/ml < 1 rok 1-4 roky 5-10 rokov 11 a viac rokov Anti-PT IgG < 38 < 26 < 22 < 38 AntiPT IgA <2 <2 <6 <12 Anti- FHA IgG < 38 < 30 < 56 < 86 Anti FHA IgA < 2 < 2 < 18 < 42 Tab. 2: Interpretácia vyšetrenia anti-pt IgG, podľa súčasnej literatúry (1,2,3). Koncentrácia protilátok triedy IgG anti-pt Klinická interpretácia Anti-PT IgG > 100 IU/ ml Indikácia na akútnu infekciu alebo nedávnu vakcináciu Anti- PT IgG < 40 IU/ ml Nie je indikácia na akútnu infekciu Anti-PT IgG IU/ ml Nevyhnutné testovaniet ďalšej j vzorky o 2-4 týždne, a vyšetrenie protilátok triedy IgA 1 Guiso N et al EU Pertstrain group Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2011; 30(3): Guiso, N., et al., EU Pertstrain group. Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2011; 30(3): Riffelmann, M., et al. Dtsch Arztebl Int., 2008; 105(37): de Melker,., et al. J Clin Microbiol. 2000; 38(2):800-6.

10 ZÁVERY väčšina prípadov pertussis v SR, hlásená do EPIS-u - diagnostikovaná pomocou sérologických metód dôkazu podiel PCR diagnostikovaných prípadov je minimálny na kultiváciu prichádza veľmi malé percento vzoriek do NRC pre pertussis sérologická diagnostika pertussis podľa EU case definition znamená: dôkaz špecifickej protilátkovej odpovede, kedy sa odoberajú párové vzorky séra s odstupom 2-4 týždne vyšetrenie na základe jednej vzorky séra aj s vysokou hladinou protilátok NIE JE v súlade s EU definíciou!!!! laboratórna diagnostika pertussis musí byť smerovaná k rýchlemu odhaleniu pôvodcu pomocou priamych diagnostických metód!!! Na prvom mieste: kultivácia a PCR nevyhnutnosť surveillance pertussis, identifikácia jednotlivých kmeňov, zisťovanie genetickej príbuznosti resp. odlišnosti sérológiabymalabyťv prípade pertussis využívaná najmä ako metóda konfirmačná stanovenie diagnózy resp. jej potvrdenie pomocou sérologických metód dôkazu je oneskorené a zväčša zastihne pacienta až v čase rekonvalescencie Vzhľadom na vysoký počet vyšetrení pertussis pomocou sérologických metód v SR je potrebné zmeniť prístup k diagnostike tohto agens tak u odbornej ako aj u laickej verejnosti!!! Fabiánová, K., Zavadilová, J. Zprávy CEM (SZÚ, Praha), 2011; 20(4):

11 Microbes vs. humans who s winning??? rdetella_pertussis As microbes learn to avoid our defenses, scientists try new tactics ti to defeat them. Steve Olson Microbes are doing things we didn't even know they could do 10 years ago. Robert Jackson

12 ĎAKUJEM ZA POZORNOSŤ