The Association of Functional Polymorphisms of IL-6 Gene Promoter with Stroke: Analysis in a Persian Population

Transcription

1 Downloaded from shefayekhatam.ir at 23: on Wednesday October 3rd 2018 [ DOI: /acadpub.shefa ] 1396 پاييز شماره چهارم د وره پنجم R e s e a r c h Art i c l e The Association of Functional Polymorphisms of IL-6 Gene Promoter with Stroke: Analysis in a Persian Population Mohammad Reza Ghasemi1, Peyman Zargari2, Hamdam Hourfar3, Maryam Pirhoushiaran1, Payam Sasan Nezhad4, Mahmoud Reza Azarpazhooh4, Ariane Sadr-Nabavi5, 1, 6* Department of Medical Genetics, School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran 2 Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran 3 Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Ahar Branch, Islamic Azad University, Ahar, Iran 4 Department of Neurology, Ghaem Hospital, Mashhad, Iran 5 Medical Genetic Research Center (MGRC), School of Medicine, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, Iran 6 Academic Center for Education, Culture, and Research (ACECR)-Khorasan Razavi, Mashhad, Iran 1 Received: 6 Jun 2016 Article Info: Accepted: 29 Jun 2017 ABSTRACT Introduction: Sequence variations in genes involved in inflammation system contribute to the risk of several cardiovascular diseases, such as stroke. Interleukin-6, a pleiotropic cytokine, is associated with cardiovascular disease, especially stroke. In other words, cerebral ischemia and inflammation are strongly linked. In the present study, we performed a genetic association study on two single nucleotide polymorphisms (IL6-572 and -174 G>C) in an Iranian population in Khorasan province. Materials and Methods: Our hypothesis was tested in this case-control study on stroke patients as well as healthy controls that matched for age, sex, and some traditional risk factors. These polymorphisms were detected by Real time Taq man probe and PCR-RFLP. Results: After adjustment for the confounding risk factors, there was an association between the female patients who suffer from stroke and the IL G>C polymorphism and also Hemorrhagic subtype of stroke. Furthermore, there was no association between IL G>C and stroke, exceptone for one allele in male group. Conclusion: In conclusion, genotype of IL G>C May be a genetics risk factor that enhances the risk for stroke in studied population. However, it is highly controversial Key words: whether IL G>C is a susceptible gene for stroke in this population. This is needed to 1. Stroke 2. Inflammation 3. Polymerase Chain Reaction be confirmed in a larger population. *Corresponding Author: Ariane Sadr-Nabavi sadrnabavia2009@gmail.com 3737

2 دوره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 محمدرضا قاسمی 1 پیمان زرگری 2 همدم هورفر 3 مریم پیرهوشیاران 1 پیام ساسان نژاد 4 محمود رضا آذرپژوه 4 آریانه *5 1 6 صدرنبوی 1 گروه ژنتیک پزشکی د انشکد ه پزشکی د انشگاه علوم پزشکی مشهد مشهد ایران 2 گروه زیست شناسی واحد علوم و تحقيقات د انشگاه آزاد اسالمی تهران ایران 3 گروه زیست شناسی د انشکد ه علوم پایه واحد اهر د انشگاه آزاد اسالمی اهر ایران 4 گروه نورولوژی بیمارستان قائم مشهد ایران 5 مركز تحقيقات ژنتيك پزشكي دانشكده پزشكي دانشگاه علوم پزشكي مشهد مشهد ايران 6 جهاد د انشگاهی خراسان رضوی مشهد ایران چــــــــكيد ه مقد مه : واريانت هاي توالي د ر ژن هايي كه د رگير د ر سيستم التهاب هستند به خطر ابتال به برخي از بيماري هاي قلبي - عروقي مانند سكتة مغزي كمك مي كنند. اينترلوكين 6- يك سايتوكين پلیوتروپ با بيماري هاي قلبي - عروقي مخصوصا سكتة مغزي د ر ارتباط است. به عبارت د يگر ایسکمیک مغزی و التهاب به شد ت با هم ارتباط د ارند. د ر مطالعة حاضر يك مطالعة همبستگي ژنتيكي روي د و پلی مورفیسم تک نوکلئوتید ی ( )IL6-572, -174 G>C د ر يك جمعيت ايراني د ر استان خراسان انجام د اد يم. مواد و روش ها : فرضية ما د ر اين مطالعة مورد - شاهد ي بر روي بيماران سكتة مغزي و كنترل هاي سالم كه براي سن جنس و برخي عوامل خطر كالسيك انطباق يافته بود ند آزمايش شد. اين پلي مورفيسم ها توسط روش Real Time Taq Man Probe و PCR-RFLP تشخیص د اد ه شد ند. يافته ها : پس از تعد يل عوامل خطر مخد وش کنند ه همبستگي بين زنان بيماري كه از سكتة مغزي رنج مي برند و پلي مورفيسم IL G>C و همچنين زیرگروه هموراژیک سکتة مغزی وجود د اشت. عالوه بر اين بين IL G>C و سكتة مغزي بجز يكي از آلل ها د ر گروه مرد ان همبستگي وجود ند اشت. نتيجه گيري : د ر نتيجه ژنوتیپ IL G>C ممكن است يك عامل خطر ژنتيكي باشد كه خطر ابتال به سكتة مغزي د ر جمعيت مور د مطالعه را افزايش مي د هد. با اين وجود اين خيلي بحث برانگيز است كه آيا IL G>C يك ژن حساس براي سكتة مغزي د ر اين جمعيت است. اين مور د نياز به تأييد د ر يك جمعيت بزرگ تر است. كليد واژه ها :.1 سکتة مغزی.2 التهاب ش زنجیره ای پلیمراز.3 واکن * نويسند ه مسئول : آریانه صد رنبوی آد رس الكترونيكي sadrnabavia2009@gmail.com : تاریخ د ريافت 17 : خرداد 1396 اطالعات مقاله : تاريخ پذيرش 8 : تير 1396 همبستگي بين پلي مورفيسم هاي عملكردي پروموتر ژن اینترلوکین 6- و سكتة مغزي : تجزيه و تحليل در بین یک جمعیت ایرانی

3 د وره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 بــا ایــن وجــو د پیشــرفت های عالــی د ر زمينــة شــناخت پیشــگیری و د رمــان ســکتة مغــزی بســیاری از عوامــل ناشــناخته د ر مــورد د یگــر مکانیس ـم های موجــود کــه باعــث ایجــاد مشــکالتی د ر پیشــگیری و د رمــان ایــن بیمــاری می شــوند وجــود د ارد. بــا وجــود اینکــه پروفایــل ژنتیکــی خــود بــه تنهایــی نقــش مهمــی د ر اســتعد ا د ابتــاء بــه ســکتة مغزی بــازی می کنــد عوامــل خطــر زیســت محیطی کالســیک ماننــد فشــار خــون بــاال ســن بــاال کلســترول بــاال د یابــت ســیگار کشــید ن چاقــی و غیــره نیــز بــا عوامــل ژنتیکــی د ر ســکتة مغــزی همراهــی نشــان می د هنــد (.)6 اگرچــه مطالعــات همبســتگی یــک ابــزار قد رتمنــ د بــرای شناســایی عوامــل خطــر ژنتیکــی هســتند انتخــاب روش مطالعــة مناســب و تکــرار نتایــج د ر گروه هــای کوهــورت مســتقل مــوارد الزم بــرای اثبــات رابطــة علــت و معلولــی بیــن یــک نشــانگر ژنتیکــی و ســکتة مغــزی اســت (.)7 ایســکمی مغــزی و التهــاب به شــد ت بــا هــم ارتبــاط د ارنــد : محرکــی کــه بــه طــور بالقــوه بــرای التهــاب مضــر و عفونــی اســت ایســکمی می باشــد و التهــاب همــراه آن یــک عامــل خطــر شــناخته شــد ه بــرای ســکتة مغــزی ایســکمیک اســت. التهــاب نیــز بــه وقایــع ایســکمیک از طریــق ارتقــاء آترواســکلروز کمــک می کنــد. پلي مورفیســم عملکــرد ی ژن هــای التهابــی ممکــن اســت باعــث احتمــال بــروز ســکتة مغــزی ایســکمیک شــود (.)8 9 ســکتة مغــزی یــک اختــال چند عاملــی پیچی ـد ه اســت کــه از علــل مهــم مــرگ و ناتوانــی د ر بزرگســاالن د ر تمــام جهــان اســت (.)1 د ر انطبــاق بــا پــروژة ســازمان جهانــی بهد اشــت مونیــکا 1 ســکتة مغــزی به عنــوان "توســعة ســریع عاليــم بالینــی متمرکز شـد ه (یــا عمومی) اختــال د ر عملکــرد تعریف شـد ة مغــزی بــه مـد ت بیــش از 24 ســاعت (مگــر اینکــه بــا عمــل جراحــی یــا مــرگ قطــع شــود ) و بــه غیــر از یــک منشــأ عروقــی هیــچ علــت ظاهــری د یگــری مشــاهد ه نشــود " ( 3.)2 همچنیــن د ر یــک تقســیم بند ی بــر اســاس پاتولــوژی ســکتة مغــزی د ر د و گــروه ایســکمیک و هموراژیــک تقســیم می شــود (.)4 د ر ســکتة مغــزی ایســکمیک ( )IS جریــان خــون بــه بخشــی از مغــز کــه مس ـد و د ش ـد ه نمی رســد و د ر نتیجــه د ر عملکــرد بافــت مغــز اختــال ایجــاد می شــود. ایــن واقعــه وقتی کــه مث ـ ا یــک آمبولــی و یــا مــوارد د یگــر ماننــد انســد اد و قطــع جریــان خــون وریــد ی مغــزی کــه احتمــاال منشــأ چربــی د ارنــد اتفــاق می افت ـد. ســکتة هموراژیــک نیــز ناشــی از یــک رگ خونــی پــاره ش ـد ه د ر مغــز اســت کــه یــا ب ـ ه وســیلة آنوریســم ایجــاد می شــود و یــا ترومــا ثانویــه کــه ی کــه یــک رگ باعــث بــه وجــود آمد نــش می شــود. هنگامــ پــاره ش ـد ه باش ـد ســلول های مغــزی تأمیــن نخواهنــد ش ـد پــس موجــب انفارکتــوس می شــود (.)5 بــه امی ـ د پی ـد ا کــرد ن اطالعــات جد یــد و د الیــل منطقــی از بــروز زود تــر و پایین تــر ســکتة مغــزی د ر شــمال شــرق ایــران کــه د ر مطالعــات قبــل اثبــات شــد ه بــود ( )13-15 مــا بــر روی ایــن د و پلی مورفیســم عملکــرد ی ایــن ژن حیاتــی کــه میانجی گــر التهــاب اســت د ر ایــن مطالعــه تمرکــز کرد یــم. مقد مه اینترلوکیــن )IL-6( 6 یکــی از ســایتوکین های التهابــی پلیوتروپیــک اســت کــه بــا تصلــب شــریان و بیماری هــای قلبــی - عروقــی همبســتگی نشــان د اد ه اســت. همچنیــن ممکــن اســت یــک میانجــی کلیــد ی د ر پاســخ التهابــی بــه ایســکمی مغــزی باشــد. ســطح IL-6 هــم د ر ســرم و هــم د ر مایــع مغــزی نخاعــی پــس از ســکتة مغــزی ایســکمیک افزایــش می یابــد بنابرایــن بــا شــد ت ســکتة مغــزی بــا بد تــر شــد ن اولیــة اعصــاب حجــم بزرگ تــر نهایــی ســکتة مغــزی و نتایــج بالینــی بد تــر د ر 6 3 و 12 مــاه ارتبــاط مســتقیم د ارد (.)8 9 ژن IL-6 از 5 اگــزون 4 اینتــرون و یــک منطقــة پروگزیمــال پروموتــر اســت کــه واقــع د ر لوکــوس کروموزومــی 7p21 د ر انســان می باشــد (.)10 مناطــق کد ینــگ پروموتــر ژن IL-6 د ارای پلی مورفیســم عملکــرد ی می باشــد کــه بــا افزایــش ســطح پالســمایی ایــن ســایتوکين د ر ارتبــاط اســت. اگــر موقعیــت -174 از ژن IL-6 تحــت تغییــر G بــه C قــرار بگیــرد یــک ســایت بالقــوة اتصــال بــرای عامــل رونویســی NF-1 ایجــاد می گــرد د کــه باعــث مهــار بیــان ژن می شــود. از ســوی د یگــر آلــل G بــا ســطح باالتــر IL-6 گرد شــی د ر ارتبــاط اســت (.)11 مــکان پلی مورفیســمی د یگــری د ر -572 ایــن ژن فعالیــت پروموتــر را تحــت تأثیــر قــرار می د هــد کــه بــه نظــر می آیــد بــه جهــت کنتــرل اثــر پلی مورفیســم د ر موقعیــت -174 اســت (.)12 مواد و روش ها جامعة مورد مطالعه روش هــای انتخــاب بیمــار بــا توجــه بــه مــورد - شــاهد ی بــود ن مطالعــه گزیــد ه شــد. بیمــاران مراجعه کننــد ه بــه بیمارســتان قائــم کــه مهم تریــن مرکــز مغــز و اعصــاب د ر شــرق ایــران می باشــد بیــن ماه هــای اســفند 1391 تــا آذر 1392 انتخــاب شــد ند. هــر بیمــار مشــکوک بــه ســکتة مغــزی توســط متخصصیــن مغــز و اعصــاب بــه جهــت تأییــد تشــخیص بیمــاری مــور د بررســی قــرار می گرفــت. بــه جهــت طبقه بنــد ی بیمــاران توســط ســکتة مغــزی نخســتین ( 2)FESs کــه بــه زیــر گروه هــای ســکتة مغــزی ایســکمیک گروه هــای خونریزی د هنــد ه ( ICH و )SAH و د یگــر گروه بنــد ی می شــد ن د از تصویربــرد اری عصبــی اســتفاد ه ش ـد. عــاوه بــر ایــن طبقه بن ـد ی بــه زیرگروه هــای ایســکمیک و هموراژیــک توســط توموگرافــی کامپیوتــری (سی تی اســکن) و تصویربــرد اری رزونانــس مغناطیســی MONICA project First-ever stroke

4 دوره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 عــاوه بــر ایــن پایــگاه د اد ه هــای ژنتیکــی توســط گــروه مــا طراحــی گرد یـد کــه 204 بیمــار ســکتة مغــزی ایزولــه و 222 فــرد ســالم غیــر مرتبــط بــا محـد ود ة ســنی 20 تــا 70 کــه از همــان منطقــة جمعیتــی بـد ون ســابقة ســکتة مغــزی بود نـد انتخــاب شــد ند. همچنیــن از نظــر ســن جنســیت و برخــی از عوامــل خطــر کالســیک ســکتة مغــزی بــا گــروه بیمــاران منطبــق 5 شــد ند. جامعــة مــورد مطالعــه (مــورد شــاهد ی) و عوامــل خطــر د ر جــد ول 1 قابل مشــاهد ه اســت. نمونــة خــون جهــت اســتخراج DNA ژنومــی بــا اســتفاد ه از کیــت اســتخراج DNA ژنومــی Prime Prep از گــروه مــورد و شــاه د گرفتــه ش ـد.6 بــا اســتفاد ه از DNA اســتخراج ش ـد ه به عنــوان الگــو انــواع مختلــف از واکنش هــای زنجیــره ای پلیمــراز ( 7)PCR انج اـم گرفــت. بــرای پلی مورفیســم G>C IL و IL G>C بــه ترتیــب از روش های RFLP- PCR Real-Time PCR Taqman probe بــرای تعییــن SNP هــا اســتفاد ه شــد. اطالعــات د قیــق د ر مــورد شــرایط PCR پرایمرهــا و پــروب توالــی د ر جــد ول 2 و 3 خالصــه شــد ه اســت. جــدول -1 اطالعــات جمعيت شــناختي و پروفایــل عوامــل خطــر در بیمــاران مبتــا بــه ســکتة مغــزی و کنتــرل مربوطــه بــرای پلی مورفیســم های -572 G>C و. IL G>C IL-6 جدول -2 پرایمرها و توالی های پروب ( Taq Man پرایمر و پروب ها به خصوص توسط نرم افزار Allele ID طراحی شده اند). جدول -3 شرایط PCR و تعیین ژنوتیپ. Catalog No K-2000; genet bio Polymerase chain reaction ( 3)MRI نیــز انجــام گرفــت. تأییــد مــوارد 4 و اخــاق کار نیــز بــر طبــق مطالعــة آقــای د کتــر آذرپــژوه و همــکاران رعایــت شــد (.)2 تعیین ژنوتیپ Magnetic resonance imaging Case ascertainment 5 Matched

5 د وره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 يافته ها نتایــج مطالعــة فــوق بــه د و قســمت اطالعــات مربــوط بــه خــود بیمــاران و افــراد کنتــرل و فراوانــی ژنوتیپ هــا تقســیم می شــو د کــه د ر ذیــل اشــاره می شــود. خصوصیات افراد بیمار و کنترل جــد ول 1 شــامل مشــخصات جمعيت شــناختي و بالینــی بیمــاران ســکتة مغــزی و نمونه هــای کنتــرل مربوطــه از جمعیــت شــرق ایــران اســت. همچنیــن تعــد اد مــرد ان و زنــان بــرای پلی مورفیس ـم های ژن IL-6 د ر ج ـد ول 1 نشــان د اد ه شــد ه اســت. به منظــور تطبیــق عوامــل خطــر غیــر ژنتیکــی هیچ گونــه تفــاوت معنــی د اری د ر ســن جنســیت فراوانی ژنوتیپ مــا 2 جامعــة آمــاری مختلــف را منــوط بــه آزمون هــای آمــاری مرتبــط بــا جمعیت هــای مختلــف و بــر اســاس فراوانی هــای ایــن پلی مورفیســم ها محاســبه کرد یــم کــه شــامل 201 : IL بیمــار ســکتة مغــزی و 201 فــرد ســالم و 203 :IL بیمــار ســکتة مغــزی و 212 ند هند ة توزیــع فــرد ســالم اســت. جد ول هــاي 4 و 5 نشــا ژنوتیپ هــا و فراوانی هــای آللــی پلی مورفیســم IL6-572G/ ند هن د ة توزیــع ژنوتیپ هــا و C و جد ول هــاي 6 و 7 نشــا فراوانی هــای آللــی پلی مورفیســم IL-6-174G/C می باشــد. ازلحــاظ آمــاری تفــاوت معن ـی د اری د ر توزیــع پلی مورفیســم IL G>C بیــن زیرگــروه زنــان کــه از ســکتة مغــزی رنــج می برد نــد و کنتــرل مربوطــه و همچنیــن د ر زیرگــروه هموراژیــک ســکتة مغــزی (بــه ترتیــب ارزش 0/007 P و )0/010 وجــود د ارد. بنابرایــن ژنوتیــپ GC و آلــل C ایــن پلی مورفیســم ممکــن اســت عامــل خطــر بــرای بیمــاران ســکتة مغــزی زنــان و همچنیــن زیرگــروه ســکتة مغــزی هموراژیــک باشــند (جد ول هــاي 4 و.)5 همان طــور کــه د ر جد ول هــاي 6 و 7 نشــان د اد ه شــد ه اســت هیــچ اختــاف آمــاری معنــی د اری د ر پلی مورفیســم ( IL G>C بجــز فراوانــی آللــی بیــن زیرگــروه مــرد ان) وجــود نـد ارد. بــه عبــارت د یگــر آلــل C از ایــن پلی مورفیســم ممکــن اســت یــک عامــل خطــر نــه چن ـد ان قابــل اطمینــان بــرای زیرگــروه مــرد ان د ر بیمــاری ســکتة مغــزی باش ـد. همچنیــن تصاويــر 1 و 2 نمونه هایــی از تجزیــه و تحلیــل آزمایشــگاهی ایــن پلی مورفیســم ها را توســط روش هــای متفــاوت مبتنــی بــر PCR نشــان می د هــد. جدول -4 ژنوتیپ و فراوانی آلل IL G>C در بیماران سکتة مغزی و برحسب جنسیت در مقابل گروه کنترل و ارزش.P 4141 د ر جامعــة مــور د مطالعــه د اد ه هــای کیفــی بـه صــورت فراوانــی کمــی بــ ه صــورت میانــه بــا انحــراف و د رصــد و د اد ه هــاي معیــار اســتاند ار د گــزارش شــد ه اســت. به منظــور مقایســة کمــی بیــن گروه هــای مــورد و ایــن متغیرهــای کیفــی و شــاهد بــه ترتیــب از آزمون هــای x2 و Student t test یــا Mann Whitney U پــس از نرم اـل ک رد ن د اد ه هاــ بــا one- sample Kolmogorov Smirnov اســتفاد ه شــد. مقــد ار ید ار آمــاری د ر نظــر P>0/05 نیــز به عنــوان ارزش معنــ گرفتــه شــد. همچنیــن تجزیــه و تحلیل هــا بــرای ســن جنســیت و همچنیــن برخــی از عوامــل خطــر ســکتة مغــزی کــه منطبــق ش ـد ه بود ن ـ د انجــام گرفــت. ســپس نســبت های مــور د انتظــار بــرای هــر ژنوتیــپ و هــر آلــل د ر گروه هــای مــورد و شــاهد محاســبه شــد. د ر نهایــت ایــن تجزیــه و تحلیل هــا همچنیــن بــه جهــت محاســبة خطــر ســکتة مغــزی د ر زیرگروه هــا و جنســیت مــور د اســتفاد ه قــرار گرفــت. همــة تجزی هـ و تحلیل هــا ب ا اس تفاد ه از نرم افــزار SPSS ويرايــش 11/5 انجــام شــد. تجزیه و تحلیل آماری د یابــت شــیرین HDL LDL تــری گلیســیرید و کلســترول کل بیــن گروه هــای مــورد و شــاهد د ر جمعیــت ایــن د و پلی مورفیســم وجــود نــد ارد.

6 دوره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 جدول -7 ژنوتیپ و فراوانی آلل IL G>C در بیماران سکتة مغزی و برحسب زیرگروه در مقابل گروه کنترل و ارزش.P جدول -6 ژنوتیپ و فراوانی آلل IL G>C در بیماران سکتة مغزی و برحسب جنسیت در مقابل گروه کنترل و ارزش.P جدول -5 ژنوتیپ و فراوانی آلل IL G>C در بیماران سکتة مغزی و برحسب زیرگروه در مقابل گروه کنترل و ارزش.P

7 د وره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 تصويــر -1 یــک نمونــه از قطعــات ران شــدة پلی مورفیســم IL G>C بــر روی ژل پلــی اکریــل آمیــد بعــد از هضــم محصــول PCR بــا آنزیــم NlaIII قطعــة 233 جفــت بــاز بــرای ژنوتیــپ ( )G/G قطعــات 233/122 جفــت بــاز بــرای ژنوتیــپ ( )G/C و قطعــة 122 جفــت بــاز بــرای ژنوتیــپ ( C/C). L: 50bp ladder B1 تــا :B5 برخــی از نمونه هــا هســتند. :N.C کنتــرل منفــی. تصوير SNP discrimination Real-time PCR -2 با پروب Taqman اختصاصی برای پلی مورفیسم ( IL G>C در تصوير نمونه ای با بحث و نتيجه گيري علی رغــم نتایــج نامطلــوب د ر مــور د ســختی تعییــن ارتبــاط منطقــی و واقعــی بیــن پلی مورفیس ـم های فاکتورهــای التهابــی بــا ابتــاء بــه ســکتة مغــزی مطالعــات اخیــر نشــان د ا ده ان ـد کــه افزایــش یــا کاهــش حساســیت بــه ســکتة مغــزی ممکــن اســت بــا تفــاوت د ر توزیــع پلی مورفیس ـم های ژن هــای د خیــل ژنوتیپ.)GC د ر سیســتم التهابــی ارتبــاط د اشــته باشـ د (.) از ایــن رو پروفایل هــای جامــع نشــانگرهاي ژنتیکــی التهــاب د ر یــک شــیو ة منحصــر بــه جمعیــت خــاص بــا ویژگــی 8 باالتــر کــه بــه معنــی حساســیت باالتــر فــرد د ر یــک جمعیــت بــرای توســعة ســکتة مغــزی اســت تعریــف شـد ه اســت. د ر جمعیــت ایرانــی هیــچ اطالعاتــي د ر مــور د نقــش ژن هــای التهابــی د ر بیماریزایی ســکتة مغــزی وجــو د نـد ارد. Specificity

8 دوره پنجم شماره چهارم پاييز 1396 برخــی از SNP هــا به ویــژه د ر پروموتــر غیــر کـد شــوند ه د ر ژن IL-6 نشــان د اد ه ش ـد ه اســت کــه تأثیــر شــگفت انگیزی د ر بیــان ایــن ژن د ارن ـد (.)26 پیــرو آن مطالعــة مــا نشــان می د هــد کــه ارتبــاط معنــی د اری بیــن ژنوتیپ هــای خــاص پروموتــر و آلــل C -572 IL-6 ســکتة مغــزی زیرگــروه زنــان وجــود د ارد (.)P>0/002 P>0/007 عــاوه بــر ایــن ایــن ژنوتیــپ و آلــل مرتبــط بــا زیرگــروه هموراژیــک ( P>0/010 )P>0/009 به جــای زیرگــروه ایســکمیک کــه مــا انتظــار د اشــتیم رابطــه د اشــته باشــد همبســتگی نشــان د اد. د ر ایــن پلی مورفیســم نشــان د اد ه شــد ه اســت کــه می توانــد بــر روی زیرگــروه هموراژیــک تأثیــر د اشــته باشـد. بــه جهــت بنابرایــن د ر ابتــد ا نتیجــه می گیریــم کــه فراوانــی آلــل C د ر منطقــة -572 پروموتــر ژن IL-6 د ر یــک جمعیــت ایرانــی (خراســان) بــرای تأییــد مطالعــات د یگــر بســیار کــم اســت. همچنیــن پلی مورفیســم ژن IL-6 د ر منطقــة -572 می توان ـد باعــث ایجــاد اســتعد اد قابل توجهــی بــه ســکتة مغــزی د ر منطقــة شــرق ایــران شــود. بــا کمــال تعجــب مــا د ریافتیــم همبســتگی قــوی بیــن زیرگــروه ســکتة هموراژیــک و ایــن پلی مورفیســم و همچنیــن د ر زیرگــروه بــا جنســیت زن کــه هــد ف مطالعــات بیشــتر آینــد ة گــروه ماســت وجــود د ارد. عــاوه بــر ایــن هیــچ ارتبــاط معنــي د اری از لحــاظ آمــاری بیــن IL G>C و ســکتة مغــزی بــه طــور کل بجــز آلــل C د ر زیرگــروه مــرد ان وجــود ند اشــت کــه مؤیـ د برخــی از مطالعــات د یگــر بــود (.)27 به عنــوان نتیجــة کلــی پلی مورفیســم IL G>C کــه د ر مکانیســم التهــاب نقــش د ارد ممکــن اســت یکــی از عوامــل خطــر ســکتة مغــزی بــرای جمعیــت شــرق ایــران محســوب شــود. بــا توجــه بــه ایــن مطلــب ایــن همبســتگی ممکــن اســت یکــی از د الیــل شــیوع بــا ســن کمتــر ســکتة مغــزی د ر جمعیــت شــرق ایــران اســتد الل شــود و بنابرایــن ایــن یافته هــا می توانــ د تأثیــر بســزایی بــرای تشــخیص ســریع تر و د رمــان بهتــر ســکتة مغــزی د اشــته باش ـد. Double-blind Placebo 11 Pilot IL-6 را تــا حــ د زیــاد ی به عنــوان مهم تریــن واســطة واکنش هــای التهابــی د ر د اخــل بـد ن و یکــی از ســایتوکین های پیــش التهابــی تصــور می کرد نـد. برخــی مطالعــات ایــن واســطة التهابــی را به عنــوان فاکتــور مفیــ د ( )21 و برخــی به عنــوان فاکتــور مضــر ( )22 پیشــنهاد د اد ه بود نــد. عــاوه بــر ایــن مطالعــات بالینــی د ر بیمــاران ســکتة مغــزی ایــن موضــوع را پیشــنهاد د اد ه اســت کــه نــه تنهــا غلظــت ســرمی IL-6 افزایش قابل توجهــی د ر ســکتة مغــزی ایســکمیک د اشــته اســت ( )16 بلکــه همچنیــن آن را به عنــوان قوی تریــن معیــار مســتقل بــرای مــرگ و میــر د ر بیمارســتان معرفــی کــرد ه اســت (.)23 د ر یــک کار آزمایــی بالینــی د و ســو کــور 9 د ر بیمــاران مبتــا بــه ســکتة مغــزی حــاد ســطح IL-6 د ر کســانی کــه د اروی rhil- 1Ra کــه یــک د اروی محافظت کنن ـد ة نورونــی اســت اســتفاد ه کــرد ه بود نــ د بــه طــور قابل توجهــی پاییــن بــود ه اســت. بــه عبــارت د یگــر نتیجــة بهتــری نســبت بــه گــروه د رمــان ش ـد ه بــا د ارونمــا 10 ارائــه د اد ه بود نـ د (.)24 عــاوه بــر ایــن شــواهد د ر ید هن ـ د کــه IL-6 یــک تنظیم کنن ـد ة حــال افزایــش نشــان م کلیـد ی مکانیســم التهابــی اســت کــه نقش محــوری د ر توســعه و پاتوفیزیولــوژی ســکتة مغــزی بــازی می کننــد (.)25 بــه جهــت مــروری بــر نــکات قــوت مطالعــه می توانیــم برخــی از مزایــای مطالعــة خود مــان را د ر پنــج مــورد طبقه بنــد ی کنیــم : اول حجــم نمونــة مطالعــة مــا یکــی از بزرگ ترین هــا د ر منطقــه اســت و بـه صــورت آزمایشــی 11 تمــام زیرگروه هــای ســکتة مغــزی را شــامل می شــو د (فراگیــر بــود ن). د وم بــه جهــت اطمینــان تائیــد و اثبــات صحــت نتایــج و جم ـع آوری نمونــه و اطالعــات افــراد مشــکوک بــه ســکتة مغــزی توســط متخصــص مغــز و اعصــاب بــه همــراه CT اســکن و ( MRI بــا توجــه بــه مطالعــة بــروز ســکتة مغــزی مشــهد ( ))MSIS تشــخیص د اد ه می شــد ند. عــاوه بــر ایــن بــرای جلوگیــری از طبقه بنــد ی ناد رســت نیــز از گزارش هــای بیمارســتانی بــه تنهایــی اســتفاد ه نکرد یــم. ســوم بــه د لیــل توجــه بــه همبســتگی بیــن ســن بــا ســکتة مغــزی یــک محـد ود ة ســنی گســترد ه تر مورد اســتفاد ه قــرار گرفــت. چهــارم ایــن د و پلی مورفیســم بــا روش هــای د قیــق آزمایشــگاهی مور د بررســی قــرار گرفتن ـد (بــا د رصــد اطمینــان بــاال و بررســی چند بــارة نتایــج) و پنجمیــن مزیــت بیمــاران و کنترل هــا بــرای حــذف اثــرات غیــر ژنتیکــی (محیطــی) عوامــل خطــر ایجاد کننــد ة ســکتة مغــزی معمــول ماننــد د یابــت ســن جنســیت عوامــل چربــی مــور د تطابــق قــرار گرفتن ـد. عــاوه بــر ایــن مطالعــات انجــام شــد ه د ر حــوزة ســکتة مغــزی د ر سرتاســر د نیــا اهمیــت پاســخ التهابــی کــه بــا آســیب نکروتیــک مغــز همــراه می شــو د را نشــان د اد ه اســت (.)17 بــا ایــن حــال مکانیســم های بســیار متفاوتــی کــه د ر بیماريزایــی ســکتة مغــزی د خیــل هســتند وجــود د ارد کــه بــه طــور فزاینــد ه ای التهــاب به عنــوان یکــی از مســیرهای مهــم تلقــی می شــود (.)18 ایــن مکانیســم بــه نظــر می رســ د بــه طــور حــاد ی د ر آسیب شناســی ایســکمیک ســهیم باشــد. التهــاب یــک واژة د ر برگیرنــد ة یــک فراینــ د پیچیــد ه کــه مســتلزم تغییــرات ســلولی هورمونــی و بیوشــیمیایی متعـد د ی اســت کــه هــر د و سیســتمیک و ارگان محــور هســتند (.)19 ســایتوکین ها واســطه های التهابــی هســتند کــه د ر مغــز پــس از ســکتة مغــزی افزایــش می یابنـد. اینترلوکیــن 6 یکــی از بیشــترین ســایتوکین مــورد مطالعــة مربــوط بــه التهــاب د ر ســکتة مغــزی اســت کــه ممکــن اســت باعــث محافظــت اعصــاب شــود (.)20 تأییــد مجـد د نتایــج مــا قصــد د اریــم بررســی د یگــری را بــا حجــم نمونــة بزرگ تــر و بــا جزئیــات بیشــتر د ر زیرگروه هــا و مکانیســم های متفــاوت به خصــوص هموراژیــک انجــام د هیــم.

9 Downloaded from shefayekhatam.ir at 23: on Wednesday October 3rd 2018 [ DOI: /acadpub.shefa ] 1396 پاييز شماره چهارم د وره پنجم منابع 1. Hachiya T, Kamatani Y, Takahashi A, Hata J, Furukawa R, Shiwa Y, et al. Genetic predisposition to ischemic stroke. Stroke. 2017; 48(2): Chauhan G, Debette S. Genetic risk factors for ischemic and hemorrhagic stroke. Curr Cardiol Rep. 2016; 18(12): 124. Doi: /s z. 2. Azarpazhooh MR, Etemadi MM, Donnan GA, Mokhber N, Majdi MR, Ghayour-Mobarhan M, et al. Excessive incidence of stroke in Iran. Stroke. 2010; 41(1): e3-e Pirhoushiaran M, Ghasemi MR, Hami J, Zargari P, Nezhad PS, Azarpazhooh MR, et al. The association of coagulation factor V (Leiden) and factor II (Prothrombin) mutations with stroke. Iran Red Crescent Med J. 2014; 16(11). e Doi: /ircmj. 3. Investigators WMPP. The world health organization MONICA project (monitoring trends and determinants in cardiovascular disease): a major international collaboration. J Clin Epidemiol. 1988; 41(2): Kumar A, Misra S, Kumar P, Sagar R, Gulati A, Prasad K. Relationship of phosphodiesterase 4D (PDE4D) gene polymorphisms with risk of ischemic stroke: a hospital based case-control study. Neurol Res. 2017; 31: Dierick F, Dehas M, Isambert JL, Injeyan S, Bouché AF, Bleyenheuft Y, et al. Hemorrhagic versus ischemic stroke: who can best benefit from blended conventional physiotherapy with robotic-assisted gait therapy? PloS one. 2017; 12(6): e Yuan H, Wang X, Xia Q, Ge P, Wang X, Cao X. Angiotensin converting enzyme (I/D) gene polymorphism contributes to ischemic stroke risk in Caucasian individuals: a meta-analysis based on 22 case-control studies. Int J Neurosci. 2016; 126(6): Terni E, Giannini N, Brondi M, Montano V, Bonuccelli U, Mancuso M. Genetics of ischaemic stroke in young adults. BBA Clinical. 2015; 3: Sand PG. IL-6 variants in ischemic stroke. Ann Neurosci. 2016; 23(1): Tong Y, Wang Z, Geng Y, Liu J, Zhang R, Lin Q, et al. The association of functional polymorphisms of IL-6 gene promoter with ischemic stroke: analysis in two Chinese populations. Biochem Biophys Res Commun. 2010; 391(1): Ghasemi MR, Zargari P, Pirhoushiaran M, Azarpazhooh MR, Sadr-Nabavi A. Is apolipoprotein genotype a reason for the excessive incidence of stroke in persian population? J Biomed. 2016; 1(1): Zargari P, Ghasemi MR, Pirhoushiaran M, Vakili V, Hami J, Farzadfard MT, et al. Renin-angiotensin a1166c polymorphism and the rrisk of stroke. Journal of Cell and Molecular Research. 2015; 7(1): Kumar P, Yadav AK, Kumar A, Sagar R, Pandit AK, Prasad K. Association between Interleukin-6 (G174C and G572C) promoter gene polymorphisms and risk of ischemic stroke: a meta-analysis. Ann Neurosci. 2015; 22(2): Becker KJ, Buckwalter M. Stroke, inflammation and the immune response: dawn of a new era. Neurotherapeutics. 2016; 13(4): Libby P, Hansson GK. Inflammation and immunity in diseases of the arterial tree. Circ Res. 2015; 116(2): Anrather J, Iadecola C. Inflammation and stroke: an overview. Neurotherapeutics. 2016: 13(4): Lee JH, Yoon EJ, Seo J, Kavoussi A, Chung YE, Chung SP, et al. Hypothermia inhibits the propagation of acute ischemic injury by inhibiting HMGB1. Molecular Brain. 2016; 9(1): 81. Doi.org/ /s Ma Y, Tang R-K, Yang X, Peng G-G, Liu Y, Wang X-M, et al. Lack of an association between interleukin-6 gene promoter polymorphisms ( 174G/C, 572G/C) and ischemic heart disease and/or ischemic stroke: a metaanalysis. Human Immunology. 2011; 72(8): Han D, Liu Z, Wang G, Zhang Y, Wu Z. Electroacupuncture improves cognitive deficits through increasing regional cerebral blood flow and alleviating inflammation in CCI rats. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine Doi. org/ /2017/ Fishman D, Faulds G, Jeffery R, Mohamed-Ali V, Yudkin JS, Humphries S, et al. The effect of novel polymorphisms in the interleukin-6 (IL-6) gene on IL-6 transcription and plasma IL-6 levels, and an association with systemic-onset juvenile chronic arthritis. J Clin Invest. 1998; 102(7): Smith CJ, Emsley HC, Gavin CM, Georgiou RF, Vail A, Barberan EM, et al. Peak plasma interleukin-6 and other peripheral markers of inflammation in the first week of ischaemic stroke correlate with brain infarct volume, stroke severity and long-term outcome. BMC Neurology. 2004; 4(1): 2. Doi.org/ /

10 23. Rallidis LS, Vikelis M, Panagiotakos DB, Rizos I, Zolindaki MG, Kaliva K, et al. Inflammatory markers and in-hospital mortality in acute ischaemic stroke. Atherosclerosis. 2006; 189(1): Emsley H, Smith C, Georgiou R, Vail A, Hopkins S, Rothwell N, et al. A randomised phase II study of interleukin-1 receptor antagonist in acute stroke patients. Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry. 2005; 76(10): Licata G, Tuttolomondo A, Di Raimondo D, Corrao S, Di Sciacca R, Pinto A. Immuno-inflammatory activation in acute cardio-embolic strokes in comparison with other subtypes of ischaemic stroke. Thromb Haemost. 2009;101 (5): Ota N, Nakajima T, Nakazawa I, Suzuki T, Hosoi T, Orimo H, et al. A nucleotide variant in the promoter region of the interleukin-6 gene associated with decreased bone mineral density. Journal of Human Genetics. 2001; 46(5): Yan J, Greer J, McCombe P. Interleukin 6 promoter 174 G/C polymorphisms in acute ischemic stroke: G allele is protective but not associated with IL-6 levels or stroke outcome. Journal of Neuroimmunology. 2016; 293: Downloaded from shefayekhatam.ir at 23: on Wednesday October 3rd 2018 [ DOI: /acadpub.shefa ] 1396 پاييز شماره چهارم د وره پنجم 46 46