Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija

Transcription

1 MOKSLAS, TEORIJA IR PRAKTIKA SCIENCE, THEORY & PRACTICE Laboratorinë medicina. 2010, t. 12, Nr. 4(48), p Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija Jelena Blaðèiuk 2 Rëda Matuzevièienë 1 Santrauka Vë þio imu no lo gi ja vie na ið po pu lia riau siø na vi kø ty ri mo sri èiø. Straips ny je ap þvel gia ma vë þio imu no lo gi jos, na vi ko su ke lia mos imu no - sup re si jos ak tu a lu mo pro ble ma, is to ri në ðios ty ri mo sri ties rai da ir nau - jau sia li te ra tû ra. Ap ta ria mi na vi ko su ke lia mos imu no sup re si jos me cha - niz mai, T re gu lia ci niø lim fo ci tø su ke lia mos imu no to le ran ci jos áta ka vë - þi nio pro ce so prog no zei. Ðian dien aki vaiz du, jog CD4 + T re gu lia ci niai lim fo ci tai (Treg làs te lës) at lie ka svar bø vaid me ná su ke liant na vi kø imu - no sup re si jà. At lik ta dau gy bë so li di niø ir he ma to lo gi niø na vi kø ty ri mø. Ðio je ap þval go je ypa tin gas dë me sys ski ria mas lë ti nei B lim fo ci tø lim fo - leu ke mi jai. Ap ta ria mi T re gu lia ci niø lim fo ci tø ty ri mai, at lik ti ðia li ga ser gan tiems þmo nëms, Treg lim fo ci tø skai èiaus pri klau so my bë nuo li - gos sta di jos, che mo te ra pi jos pro to ko lo pa si rin ki mo, ga li mi T re gu lia ci - niø lim fo ci tø for ma vi mo si ir at spa ru mo che mo te ra pi jai me cha niz mai: pa di dë jæs Treg lim fo ci tø for ma vi ma sis CD70 CD27 kos ti mu lia ci jos me - tu ir ðio Treg lim fo ci tø su si da ry mo bû do sà sa jos su pa ki tu sia an ti apop - to zi niø ir pro apop to zi niø Bcl ðei mos bal ty mø raið ka. Nag ri në ja ma Bcl ðei mos bal ty mø áta ka T re gu lia ci niø lim fo ci tø ge bë ji mui ið veng ti flu da - ra bi no su ke lia mos apop to zës. Re mian tis li te ra tû ra straips ny je pa tei kia - mi ga li mi gy dy mo bû dai. Nu ro do mos gy dy mo flu da ra bi nu al ter na ty vos: gy dy mas ta li do mi du ir jo ana lo gais, trans for muo ja tá au gi mo fak to riø (TGF- ) ma þi nan èiais vais tais, Bcl ðei mos an ti apop to zi niø bal ty mø in - hi bi to riais. Ap ta ria ma den dri ti niø làs te liø vak ci na ci ja ir jos áta ka Treg lim fo ci tø ma þi ni mui ser gant lë ti ne B lim fo ci tø lim fo leu ke mi ja. Nag ri në - ja mi ga li mi gy dy mo ðiuo bû du keb lu mai, siû lo ma, kaip juos áveik ti. Reikð mi niai þo dþiai: Treg làs te lës, B lim fo ci tø lë ti në lim fo leu ke mi ja, Bcl ðei mos bal ty mai, flu da ra bi nas, ta li do mi das ir jo da ri niai, den dri ti - niø làs te liø vak ci na ci ja. 1 Vilniaus universiteto Medicinos fakulteto Fiziologijos, biochemijos ir laboratorinës medicinos katedra Vilnius University, Faculty of Medicine, Department of Physiology, Biochemistry and Laboratory Medicine El. paðtas: redalija@gmail.com 2 Vilniaus universitetas Vilnius University ÁÞANGA Pa sau lio svei ka tos or ga ni za ci jos duo me ni mis, ávai rios on ko lo gi nës li - gos yra vie nos daþ niau siø mir ties prie þas èiø pa sau ly je [1]. Tai ska ti na moks li nin kus ieð ko ti bû dø pa ge rin ti pik ty bi niø li gø diag nos ti kà ir gy dy - mà, efek ty viau ir sau giau su nai kin ti vë þi nes làs te les. Dar XX a. pra dþio je vo kie èiø moks li nin kas Pau las Eh ri - li chas ið kë lë imu ni nës sis te mos svar bos vë þio pa to ge ne zë je hi po te zæ. Lai kui bë gant vë þio imu no lo gi jos sri - ty je bu vo at lik ta daug ty ri mø ir nau - jø at ra di mø. Pas ta rai siais de ðimt - me èiais su pra tus, jog vais tai, var to - ja mi vë þi nëms làs te lëms su nai kin ti, në ra vi sið kai efek ty vûs, na vi ko mik - ro ap lin kos ir imu ni nio at sa ko ty ri - mai ága vo nau jà pa grei tá. Da bar aki - vaiz du, jog vë þi nis pro ce sas tai di - LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48) 219

2 Jelena Blaðèiuk, Rëda Matuzevièienë dþiu lis ið ðû kis imu ni niam or ga niz - mo at sa kui. Evoliucionuodami organizmai ágijo ga lin gus gy ny bos nuo ne op la zi niø làs - teliø mechanizmus metais Mac - Far la ne Bur net sa vo imu ni nës prie - þiû ros te ori jo je ið kë lë min tá, kad imu - ninë sistema gali atpaþinti ir sunai - kinti pakitusias làsteles dar prieð su - si da rant na vi kui. Vys tan tis na vi ki - niam procesui, vëþinës làstelës ágyja naujø antigenø arba pakinta ðeimi - nin ko an ti ge nø raið ka. To kios an ti ge - nø gru pës, kaip su na vi ku su si jæ an ti - ge nai (angl. tu mour-as so ci ated an ti - gens) [2], su naviku susijæ karbohidra - tiniai antigenai (angl. tu mour-as so ci - ated car bo hy drate an ti gens) [3], on ko - fetaliniai antigenai [4], sergant virusi - ne infekcija ágyti antigenai, yra susiju - sios su onkologinëmis ligomis. Ðie an - tigeniniai pokyèiai yra daugelio muta - cijø, vykstanèiø neoplazinëse làstelë - se, on ko ge ni niø vi ru sø in fek ci jos ir pa - kitusios ðeimininko antigenø gamybos padarinys [5]. Vykstant tokiems pro - cesams, normaliomis aplinkybëmis tu - rëtø susidaryti stiprus imuninis atsa - kas á vëþines làsteles. Nustatyta daug ga li mø imu ni nës gy ny bos bû dø. Ðiuo me tu aið ku, jog imu ni nës sis te mos efek to ri në gran dis: na tû ra lûs þu di kai (NK làstelës), citotoksiniai T limfoci - tai, an ti ge nà pa tei kian èios làs te lës, an ti kû nai prieð na vi ko an ti ge nus, ci - to ki nai ir t. t. [6], yra átrauk ta á or ga - niz mo gy ny bà nuo na vi kø. Pas ta rai siais de ðimt me èiais at si - rado dau gy bë te ori jø apie na vi ko ge bë - jimà slopinti ðeimininko imuniná atsakà. Jau árodyta, kad vëþinës làstelës ge ba slo pin ti ðei mi nin ko imu ni næ sistemà keliais bûdais: aktyvindamos mieloidinës kilmës supresines làsteles, slopindamos dendritines làsteles, gamindamos ávairius supresinius cito - kinus. Taip pat vëþinës làstelës geba eks pre suo ti pa grin di ná au di niø su de - ri na mu mo kom plek sà (angl. Ma jor histocompatibility com plex MHC) be kostimuliaciniø molekuliø, kad uþblo - kuotø efek to ri nës imu ni nës sis te mos gran dies ak ty vi ni mà. Ta èiau vie nas didþiausiø vëþio sukeltos imunosupre - sijos tyrimo laimëjimø buvo 1990 me - tais atrasti T reguliaciniai limfocitai, arba Treg làstelës. Ðios làstelës pri - klauso CD4 + T limfocitø populiacijai, ku ri ko eksp re suo ja CD25 high ir FOXP3 + þymenis [7]. Lentelëje pateikiami T reguliaciniø limfocitø pavir - ðiuje ekspresuojami þymenys. Þyme - nys, naudojami Treg limfocitams nu - statyti, yra specifiniai. Organizme ðios làstelës palaiko imuninës sistemos to - lerancijà savo antigenams, taip kon - tro liuo da mos imu ni næ ho me os ta zæ [8 11]. Daþ niau sia he ma to lo gi në vë þi në li ga Va ka rø ða ly se yra lë ti në B lim fo - ci tø lim fo leu ke mi ja (angl. B cell chronic lymphocytic leu ke mia CLL) [12, 13] ne op la zi në li ga, ku ria ser - gant krau jy je, kau lø èiul puo se ir lim - fi niuo se au di niuo se kau pia si á ma þus, su bren du sius lim fo ci tus pa na ðios làs - te lës. Ðia me dar be ap þvelg si me CD4 + CD25 high FOXP3 + làs te liø skai - èiaus didëjimo mechanizmus ir gali - mas gydymo taktikas siekiant suma - þinti Treg làsteliø CLL ligoniams. CD4 + CD25 high FOXP3 RE GU LIA CI NIØ LÀS TE LIØ SUKELTA IMUNOSUPRESIJA SER GANT VË ÞIU Lentelë. T reguliaciniø limfocitø þymenys Ta ble. Markers of T regulatory lymphocytes Þymuo CD25 FoxP3 CTLA4 (CD152) GITR LAG3 (223) CD127 Pastabos Atsiþvelgiant á Treg limfocitø kilmæ, specifiðkumà antigenui ir supresijos mechanizmus, ði làsteliø populiacija skirstoma á du poklasius: làsteles, ku - rios susiformuoja uþkrûèio liaukoje natûralius T reguliacinius limfocitus (ntreg) [14 16], ir periferiniame kraujyje susidaranèius Treg limfocitus in du kuo tuo sius T re gu lia ci nius lim fo - citus (itreg) [17 18]. Naturalûs Treg limfocitai susidaro ið làsteliø pirmta - kø uþ krûèio liaukoje. Ðiame procese dalyvauja dendritinës, þievinës ir ðer - di nës epitelinës làstelës. Periferiniame kraujyje naivios Treg làstelës virsta efektoriniais T reguliaciniais limfo - citais. Taip pat galimas Treg limfocitø formavimasis de novo prin ci pu ið pe ri - fe ri nia me krau jy je esan èiø nai viø FOXP3 T làs te liø. In vi tro ðis vir smas indukuojamas TGF- citokinu ar vita - mino A metabolitu (retinoine rûgðtimi). To kioms indukuotoms Treg làstelëms bûdinga kintanti FOXP3 ekspre - sija. Nustatyta, jog TGF- ir retinoinë rûgðtis (galbût ir kiti faktoriai) gali dalyvauti susidarant Treg limfocitams in vivo. Taèiau periferiniame kraujyje in vivo susidariusiø Treg làsteliø stabi lu mas vis dar ne aið kus (1 pav.). Eks - pe ri men tuo jant su pe lë mis áro dy ta, kad sumaþëjæs Treg limfocitø skaièius su si jæs su au to imu ni niø li gø raið ka [19] ir, prieðingai, padidëjæs Treg làs - teliø skaièius periferiniame kraujyje su ke lia imu no sup re si jos bûk læ [20]. Atradus Treg làsteles buvo árodyta ðiø lim fo ci tø svar ba au to imu ni niø li gø patogenezëje. Deja, tyrimai buvo ne - pakankamos imties dël ðios làsteliø po pu lia ci jos þy me nø trû ku mo. Ið pra - dþiø manyta, kad Treg limfocitai turi CD4 + CD25 high þymenis [7]. Padëtis pa - si kei të at ra dus FOXP3 (angl. fork head ex pres sion pro tein) þy me ná pa - grin di ná Treg làs te liø transk rip ci jos fak to riø (len te lë) [21]. Ðio þy mens at - ra di mas pa ska ti no moks li nin kus ið - plësti tyrimus, todël buvo pradëta tirti ðiø làsteliø reikðmë kitø ligø patoge - nezëje. Pastaraisiais metais atsirado duo me nø, jog FOXP3 þy muo në ra spe - cifiðkas Treg limfocitams. Kelios stu - dijos árodë, jog aktyvinti CD4 + ir CD8 + limfocitai po sàveikos su antigenu gali lai ki nai eks pre suo ti FOXP3. Per trumpà laikà, kai làstelëje yra gami - na mas ðis þy muo (48 72 va lan dos), aktyvintø CD4 + ir CD8 + làsteliø kultû - ros ágyja supresiná aktyvumà. Supre - sinës savybës transformuojasi á cito - toksines, kai baigiasi FOXP3 gamyba [22]. Ðis tyrimas paskatino ieðkoti ki - tø þy me nø, bû din gø tik Treg lim fo ci - tams. Nu sta ty ta, jog su ma þë ju si CD127 gamyba làsteliø pavirðiuje galimas ðiø limfocitø þymuo, ypaè ver - ti nant já kar tu su tei gia ma CD25 ir FOXP3 eks pre si ja [23]. Vis dël to iki ðiol në ra vie nos nuo mo nës dël ðiø þy - menø naudojimo Treg limfocitam aptikti. Eks pe ri men ti niais ir kli ni ki niais ty ri mais nu sta ty ta, jog esant vë þi - niam pro ce sui Treg lim fo ci tø pa dau - gëja ne tik periferiniame kraujyje, bet ir na vi kà dre nuo jan èiuo se limf maz - giuo se ir pir mi në je na vi ko mik ro ap lin - ko je [20, 24, 25]. Daþ niau siai Treg làs - teliø pagausëjimas yra susijæs su na - Visi T limfocitai po aktyvacijos ekspresuoja ðá þymená Treg limfocitø þymuo. Randamas CD4+ ir CD8+ làsteliø kultûrose po aktyvacijos Pradedamas ekspresuoti ant visø CD4+, CD8+ limfocitø antrà treèià dienà po aktyvacijos Pradedamas ekspresuoti ant visø CD4+, CD8+ limfocitø antrà treèià dienà po aktyvacijos Pradedamas ekspresuoti ant visø CD4+, CD8+ limfocitø antrà treèià dienà po aktyvacijos. Ekspresuoja NK T reguliaciniams limfocitams bûdingas CD LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48)

3 Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija Uþkrûèio liauka Subkapsulinë zona Þievinës epitelinës làstelës Uþkrûèio liaukos dendritinës làstelës Ðerdinës epitelinës làstelës T làsteliø pirmtakas Þievë +/- IL-10 ir/ar TGF- Ðerdinë + FOXP3 FOXP3 Periferinis kraujas +TGF- +IL-2 + FOXP3 Naivus T reg limfocitas FOXP3 Naivus T limfocitas Antigeno sukelta diferenciacija +TGF- +/- kiti faktoriai +TGF- +/- Retinoinë rûgðtis + FOXP3 efektorinis atminties T reg limfocitas + FOXP3 de novo indukuotas T reg limfocitas FOXP3 efektoriniai T limfocitai + Nestabilus FOXP3 T reg limfocitas 1 pav. T reguliaciniø limfocitø formavimosi procesas Fig. 1. Process of development of T regulatory lymphocytes (Huehn J, Julia K, Polansky JK, Alf Hamann A. Epigenetic con trol of FOXP3 ex pres sion: the key to a sta ble reg u la tory T-cell lin eage? Na ture Re views Im mu nol ogy 2009; 9: 83 9) vi ko vys ty mu si. Pa blo gë jæs ið gy ve na - mu mas bu vo nu sta ty tas tø li go niø, ku rie ser ga plau èiø [26, 27], ka sos, kiau ði dþiø [28], ke pe nø [29] ir skran - dþio [30, 31] vë þiu ir jiems ran da mas Treg làs te liø pa gau së ji mas. Ta èiau padidëjæs Treg limfocitø skaièius susi - jæs su ge ra to kiø li gø prog no ze kaip galvos ir kaklo karcinoma [32], storosios þarnos karcinoma [33], B làsteliø lim fo ma, gi gan ti niø B làs te liø lim fo - ma, fo li ku li në lim fo ma [34, 35]. Treg lim fo ci tø po pu lia ci ja ne tu ri jo kios áta - kos prostatos ir inkstø navikø [36], tie sio sios þar nos kar ci no mos [37] ir kai kuriø storosios þarnos karcinomø [38] prog no zei. On ko logijoje piktybinës hematologinës ligos uþima ypatingà vietà. Pas - ta ruo siuos metus Treg làsteliø poky - èiai buvo tirti ligoniams, kurie sirgo B làs te liø lim fo ma, mie lo mi ne li ga, T limfocitø piktybinëmis ligomis. Kitø ty ri mø duo me ni mis, Treg làs te liø skaièius didëja sergant ávairiø rûðiø B limfocitø limfoma: Hodþkino, foliku - line, dideliø B làsteliø. T reguliaciniø lim fo ci tø skai èiaus pa di dë ji mas ser - gant ðio mis li go mis yra su si jæs su ge ra prognoze [34, 35]. CLL SER GAN TYS LI GO NIAI IR CD4 + CD25 high FOXP3 LIM FO CI TØ PO KY ÈIAI Pa pras tai CLL diag no zuo ja ma li go - niams, kuriø absoliuti limfocitozë di - des në nei 5000/ L, tëkmës citometrijos bûdu nustatomi kloniniai B limfo - ci tai, ku riems bû din gi CD5, CD19, CD20, CD23, CD79b þy me nys, ka pa ar lamb da imu nog lo bu li nø gran di niø re - strik ci ja [39, 40]. CLL sta di jos nu sta - to mos pa gal dvi sis te mas Rai ir Bi - LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48) 221

4 Jelena Blaðèiuk, Rëda Matuzevièienë a) Imunosupresiniai b) Citolizë Membraninis TGF- TGF- Granzimas A arba B T limfocitas reg IL-10 Efektorinë T làstelë Perforino pora Apoptozinis efektorinis T limfocitas c) Metabolinis paþeidimas d) Dendritiniø làsteliø (DL) paþeidimas Apoptozë dël citokinø netekimo Adenozinas Dendritiniø làsteliø brendimo ir funkcijø slopinimas 2 pav. T reguliaciniø limfocitø sukeltos imunosupresijos mechanizmai Fig. 2. T regulatory lymphocyte supression mechanisms (Vignali AD, Collison LW, Work man CJ. How reg u la tory T cells work. Na - ture Re views 2008; 8: ) net. Vertinant ligos stadijà pagal Rai sistemà, atsiþvelgiama á limfocitozës, anemi jos, trom bo ci to pe ni jos, lim fa de - nopatijos lygá, hepatomegalijà ir sple - nomegalijà [41], o pagal Binet siste - mà á pa þeis tø limf maz giø skai èiø, ane mi jos ir trom bo ci to pe ni jos ly gá [42]. Iðtyrus Treg limfocitø kitimus ser - gant CLL nu sta ty ta, kad ser gant B limfocitø lëtine limfoleukemija Treg làsteliø padaugëja [43 46] ir tai susijæ su blo ges ne prog no ze. Li go niø, ku - riems liga jau ásigalëjusi, Treg limfoci - tø kie kiai bu vo di des ni. Ádo mu tai, kad ne Hodþ ki no lim fo mø (ku rios yra ar ti - mos CLL) ty ri mai pa ro dë, jog pa di dë - jæs Treg lim fo ci tø kie kis taip pat yra su si jæs su blo ga prog no ze [34, 35]. To - dël bûtina atsakyti á ðiuos klausimus: 1) Ko kia yra pa di dë ju sio Treg lim fo ci tø skai èiaus prie þas tis ser - gant CLL? Ar Treg skaièiaus didëjimo mechanizmas yra panaðus á T reguliaciniø lim fo ci tø dau gë ji mo me cha niz mus sergant kitomis vëþinëmis ligomis. Lo - giðkai màstant, pakinta pagrindiniai procesai: padidëja Treg làsteliø proli - feracija ir sumaþëja jø apoptozë. Ðian - dien jau þinoma, jog neoplazinës CLL làstelës iðskiria TGF- ir IL-10 ci to ki - nus. Treg làsteliø susidarymas skati - na mas dviem pa grin di niais bû dais: vykstant antigeninei stimuliacijai ir esant TGF- ar IL-10 imunosupresi - niø citokinø aplinkoje [47 50]. Treg lim fo ci tø apop to zës slo pi ni mas taip pat gali sudaryti prielaidà daugëti ðiø làs te liø. On ko lo gi jo je ge rai þi no ma, kad dël mutacijø slopinami apoptozës procesai vëþinëse làstelëse. Taigi svar - bu iðtirti Treg limfocitø savybes, ypaè ge bë ji mà iðvengti apoptozës. 2) Ko kia gru pë vais tø yra tin - ka miau sia CLL gy dy ti ir Treg lim - fo ci tø skai èiui ma þin ti? Pastaraisiais metais intensyviai ti - ria ma, kaip ga li ma su ma þin ti Treg làs te liø skai èiø on ko lo gi niø li go niø kraujyje. Jau atrastos medþiagos, ge - banèios naikinti ðias làsteles. Taèiau moks li nin kai su si du ria su ki to mis pro ble momis. Tai Treg limfocitø atsinaujinimas kraujyje po redukcinës te - rapijos. Be to, maþinant ðiø limfocitø skaièiø kai kuriais antikûnais, gali su - maþëti ir citotoksiniø limfocitø, kurie rei ka lin gi imu ni niam at sa kui prieð navikà. Pasitaiko ir sunkiø nepagei - dau ja mø au to imu ni niø re ak ci jø. To - dël re dukcinë Treg làsteliø terapija tu - rë tø bû ti per þiû rë ta. CD4 + CD25 high FOXP3 LÀS TE LIØ FORMAVIMASIS SERGANT VË ÞI NE LI GA Ðiuo me tu jau aki vaiz du, kad na vi kas ska ti na Treg làs te liø for ma vi mà si ir mig ra ci jà á jo ap lin kà. Vë þi nës làs te lës ga mi na CCL22 li gan dà. Ði me dþia ga jun gia si su CD194 re cep to riais, esan - èiais ant Treg làs te liø pa vir ðiaus, ir pa di di na Treg lim fo ci tø mig ra ci jà á vë - þi næ ap lin kà. CD4 + CD25 high FOXP3 làs te liø pa grin di në funk ci ja yra blo - kuo ti imu ni ná at sa kà, nu kreip tà prieð na vi kà [51]. Su pre si niø ci to ki nø, to - kiø kaip TGF- ir IL-10, per fo ri no ir gran zi mo A ir B, at pa lai da vi mas, IL-2, ki tø imu nos ti mu lia ci niø ci to ki - nø, kos ti mu lia ci niø re cep to riø, ku rie rei ka lin gi vi sa ver tei NK làs te liø ir ci - to tok si niø T lim fo ci tø funk ci jai, kie - kio su ma þi ni mas, den dri ti niø làs te liø bren di mo slo pi ni mas bei in do la mi no 2,3-de ok si ge na zës (IDO) at pa lai da vi - mas yra pa grin di niai vë þio su kel tos imu no sup re si jos me cha niz mai (2 pav.) [52 55]. Ðis efek to ri nës imu - ni nës sis te mos gran dies blo ka vi mas ska ti na na vi ko vys ty mà si. Ta èiau pa - di dë jæs Treg làs te liø for ma vi ma sis vë LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48)

5 Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija þi nio pro ce so me tu vis dar në ra nuo - du giai ið tir tas. Ty ri mai pa ro dë, kad pa di dë ju si TGF- ir IL-10 ga my ba vë - þi në se làs te lë se ir ne su bren du sio se den dri ti në se làs te lë se (IMDC) ska ti na Treg lim fo ci tø for ma vi mà si ið nai viø CD4 + T làs te liø. Treg lim fo ci tai ga mi - na tuos pa èius fak to rius [53] ir taip su si da ro cir cu lus vi tio sus. Treg làs te - lës di di na in do la mi no 2,3-de ok si ge na - zës ið si sky ri mà. Ði me dþia ga ga mi na - ma den dri ti niø làs te liø, jos pa grin di - në funk ci ja yra slo pin ti CD8 + T làs te - les ir kar tu ska tin ti CD4 + nai viø lim - fo ci tø vir ti mà á Treg làs te les [56]. Ke li au to riai sa vo ty ri mais nu sta të, jog IDO ga mi na mas dau ge lio na vi kø mik - ro ap lin ko je (na vi kà dre nuo jan èiuo se limf maz giuo se) ir pa èia me na vi ke [57, 58]. PA DI DË JÆS CD4 + CD25 high FOXP3 LÀS TE LIØ FORMAVIMASIS SERGANT CLL Norint parengti tinkamiausià gydymo strategijà, kurios tikslas sumaþinti Treg làsteliø skaièiø, bûtina suprasti Treg lim fo ci tø for ma vi mo si me cha niz - mà ser gant CLL. M. Jak ir kt. (2009) savo tyrime aptarë galimà Treg làste - liø formavimosi bûdà. Autoriai paro - dë, jog Treg lim fo ci tø pro li fe ra ci ja ga li bûti indukuojama per CD154, kuris padidina CD70 ekspresijà B-CLL làstelës pavirðiuje, o jis savo ruoþtu sti - muliuo ja CD27, I ti po gli kop ro tei nà. Ðie visi ligandai ir receptoriai priklau - so na vi kø ne kro zës fak to riø re cep to riø (TNFR) ðei mai. Dau ge lis ðios ðei mos mo le ku liø, to kiø kaip CD30, OX40 ir 4-1BB, atlieka T làsteliø kostimuliavi - mo funk ci jà. CD70 CD27 da ly vau ja T ir B lim fo ci tø, NK làs te liø [59] kos ti - mu lia ci jo je. Ðiø mo le ku liø sà vei ka kontroliuoja T ir B limfocitø, NK làsteliø diferenciacijà, proliferacijà ir þû - ties procesus. Aktyvinti T ir B limfoci - tai savo pavirðiuje ekspresuoja CD70 ligandà, kurio ekspresija koreliuoja su nuo CD27 pri klau so mu CD4 + ir CD8 + làsteliø daugëjimu [60]. Ðiuos teiginius re mia ir ki tos stu di jos, ku rios nu - sta të, jog esant CD30, OX40, 4-1BB, CD27 trûkumui organizmas yra im - lesnis ávairioms infekcijoms [59]. Ðiø medþiagø stoka taip pat silpnina anti - navikiná imunitetà [61]. Autoriai [46] tei gia, jog per CD154 sti mu liuo tos B-CLL làstelës ekspresuoja CD70 (tri - jø li go niø krau jo më gi niai, n = 3). Be to, Treg làs te liø skai èius smar kiai pa - didëjo ketvirtà dienà po CD154 stimu - lia ci jos (p = 0,019). Toks pat po vei kis gautas po autologiniø T làsteliø inku - ba ci jos su CD154-sti mu liuo to mis B-CLL làs te lë mis (n = 4), bu vo nu sta - tyta padidëjusi FOXP3 ekspresija. Ðis eks pe ri men tas bu vo pa tik rin tas su an ti kû nais prieð CD70. Uþ blo ka vus CD70, Treg lim fo ci tø skai èius la bai sumaþëjo. Todël autoriai pasiûlë nau - jà Treg làsteliø formavimosi bûdà per CD70 CD27 kostimuliacijà. Ðià idëjà paremia ir kitos studijos. Keli tyrimai áro dë Treg lim fo ci tø for ma vi mà si CD70-CD27 bû du, ser gant ne Hodþ ki - no lim fo ma [62, 63]. CLL li go niø Treg lim fo ci tø apop - to zës ty ri mai taip pat at sklei dë nau jø ádo miø fak tø. Bu vo ti ria mi bal ty mai, su si jæ su làs te liø apop to ze (Bcl ðei - mos pro apop to zi niai ir an ti apop to zi - niai bal ty mai). Treg ir ci to tok si nës CD4 + làs te lës bu vo ið skir tos ið svei kø do no rø krau jo (n = 3). Treg lim fo ci tai eks pre sa vo di des nius kie kius pro - apop to zi niø NO XA mo le ku liø (p = 0,02). An ti apop to zi niø mo le ku - liø, to kiø kaip Bcl-2, eks pre si ja bu vo san ty ki nai ma þes në, pa ly gin ti su CD4 + lim fo ci tø (p = 0,01). Taip pat bu - vo áver tin tas CLL ser gan èiø li go niø (n = 2) Treg lim fo ci tø apop to zi nës sa - vy bës. Treg lim fo ci tuo se, ið kir tuo se ið CLL li go niø (n = 21), an ti apop to zi niø bal ty mø (Bcl-2 ir IAP-2) eks pre si ja bu vo di des në, o No xa kie kis aið kiai ma þes nis. M. Jak ir kt. pa nei gë idë jà, jog an - tiapoptoziná aktyvumà sukelia CD70 stimuliacija. Taèiau autoriai nepatei - kia jo kiø duo me nø ir pa aið ki ni mø, ko - dël jie da ro to kias ið va das. Ga li bû ti, kad ryðio tarp suaktyvëjusios CD70 stimuliacijos ir pakitusiø apoptoziniø savybiø esama. Logiðka manyti, kad antiapoptoziniø savybiø turintys limfocitai ir Treg limfocitai, susiformavæ CD70 CD27 bû du, yra tos pa èios kil - mës. Áro dymø, jog ðie limfocitai formavosi dviem skirtingais bûdais, nëra. Áma no ma, kad dël pa di dë ju sios CD70 CD27 stimuliacijos Treg làste - liø proapoptozinës savybës pakeièia - mos antiapoptozinëmis. Ðià mintá gali pa rem ti ir stu di ja, ku ri áro dë, jog CD70 CD27 kelias skatina antiapopto zi niø bal ty mø ga my bà CD4 + nai - viuose limfocituose ir jø diferenciacijà á Th1 làsteliø populiacijà [60]. Ðis pro - cesas vyksta padidëjus IL-12 R 2 eks - presijai, kuri skatina padidëjusià anti - apoptoziniø baltymø (Bcl- XL ) ga my bà CD4 + limfocituose. IL-12 yra efektoriniø làsteliø mediatorius, kurá gamina vienb ran duolës làstelës. Po antigeninës stimuliacijos ðis mediatorius ska - tina IFN- gamybà T limfocituose ir NK làstelëse, sukelia Th0 limfocitø di - ferenciacijà á IFN- ga mi nan èius Th1 limfocitus. Kiti autoriai árodë, jog stimu liuo jant CD154 ska ti na ma an ti - apoptoziniø molekuliø gamyba (Mcl-1, Bcl- XL ir Flip). Be to, or ga niz me ga mi - na mos ir pro apop to zi nës mo le ku lës (No xa, Pu ma, Bid ir Bax) [65]. Ðie pro - apoptoziniai baltymai sukelia làsteliø þûtá, tiesiogiai veikdami mitochondri - jas, endoplazminá tinklà ir lizosomas. Mi to chon dri jo se apop to zë su ke lia ma per me a bi li zuo jant ðiø or ga ne liø membranà. Dël ðios prieþasties tokie apoptozës mediatoriai, kaip kaspazes aktyvinantys baltymai, patenka á ci - toplazmà ir ðis procesas pradeda pro - gramuotà làstelës þûtá. Antiapoptozi - niai Bcl-2 ðeimos baltymai apsaugo or - ga ne les nuo per me a bi li za ci jos, taip slopindamos apoptozæ. Permeabilizacija, sukelta proapoptoziniø molekuliø, dar gali vykti ir endoplazminiame tinkle, taèiau jos mechanizmas vis dar nëra iki galo aiðkus. Lizosomose ðie apoptozæ skatinantys baltymai indukuoja autofagijos procesus. Proapopto - zi niø bal ty mø ge nø mu ta ci jos daþ nai pasitaiko vëþinëse làstelëse. Ðios mu - ta ci jos ga li keis ti ir che mo te ra pi jos efek ty vu mà [66]. Qu ir kt. [67] at li kæ tyrimà nustatë peliø Treg làsteliø atsparumà gama spinduliams. 12 valandø po ðvitinimo ðiais spinduliais nai - viø CD4 + limfocitø skaièius smarkiai sumaþëjo, o CD4 + CD25 + limfocitø labai pa di dë jo. Ðie fak tai pa grin dþia prie lai dà, jog Treg làs te lës po CD70 CD154 stimuliacijos gali eks - presuoti daugiau antiapoptoziniø bal - tymø. Prielaidai pagrásti reikia nuo - dug niø ty ri mø. Ky la dar vie nas klau - simas: jei CD70 CD27 kostimuliacija skatina citotoksiniø T làsteliø susida - rymà, kodël ðeimininko imuninë sistema negali kovoti su liga? Kodël imuni - nis balansas pasislenka imunosupre - si jos pu sën? Á ðá klau si mà vis dar ne at - sakyta. Minëtas reiðkinys gali bûti susijæs su naviko mikroaplinka (nagrinëjamu atveju CLL mikroaplinka). Árodyta, kad supresinio citokino TGF-, in du - kuo jan èio nai viø CD4 + limfocitø virti - mà Treg làstelëmis, gamyba padidëjusi dau ge ly je, tarp jø ir CLL, vë þi niø làsteliø [49]. Kadangi CLL làstelës tai pakitæ B limfocitai, jos turëtø bûti jautrios supresiniam minëto citokino po vei kiui. De ja, mu ta væ TGF- re cep - toriai padaro ðiuos neoplazinius B limfo ci tus ne jaut rius TGF- [69]. Pri si - minkime [60] tyrimà, kuriame árodomas dël CD70 CD27 sà vei kos pa di dë - jæs nuo IL-12 prklau so mas CD4 + efek - torinës atðakos formavimasis. CLL li - goniø Treg làsteliø formavimosi situa - cija panaði: antigeninë stimuliacija ir CD70 CD27 kos ti mu lia ci ja yra, trûksta tik tinkamo citokino. Galbût IL-12 citokinà pakeièia TGF-, ku rio ga my ba yra pa di dë ju si CLL li go - niams. Ðio citokino sintezës didëjimas, LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48) 223

6 Jelena Blaðèiuk, Rëda Matuzevièienë matyt, ir paslenka T limfocitø balansà Treg làsteliø link. Ðià hipotezæ galima pritaikyti ir ki - tiems navikams. Remiantis [69] studi - ja árodyta, kad metastazinë inkstø làs - teliø karcinoma (mrcc) gamina di - des ná kie ká CD70. An ti kû nai prieð CD70, ku rie bu vo nau do ja mi mrcc gydyti, sukëlë RCC metastaziniø làsteliø apoptozæ [70]. Þmogaus glioblas - tomos CD70 + làstelës sukelia citotok - siniø T limfocitø apoptozæ [71]. Ka - dan gi në ra tvir tos te ori jos, kaip ði apop to zë su ke lia ma, ga li ma ið kel ti prielaidà, kad aktyvinti Treg limfoci - tai su ke lia ci to tok si niø T lim fo ci tø apop to zæ per fo ri no ir gran zi mo ke liu [72, 73]. Be ki ta ko, mi në tos hi po te zës ga li pa aið kin ti Treg làs te liø pri klau so my - bæ nuo li gos sta di jos. Re mian tis straips niø duo me ni mis, li gai pro gre - suo jant Treg skai èius di dë ja [43 46]. Abi skirs ty mo á sta di jas sis te mos (Rai ir Bi net) kaip vie nà ið ro dik liø átrau - kia limf maz giø dy dá, taip pat vie nas ið prog no zi niø þy me nø yra lim fo ci tø da - li ji mo si grei tis. Di dë jant limf maz giø ma sei, nu sta to mas li gos pro gre sa vi - mas. Vi si ðie fak tai pa re mia min tá, jog CD70 CD27 sti mu liuo tos CLL làs te - lës ga li bû ti ið limf maz giø. Taip pat pa di dë jæs ne op la zi niø lim fo ci tø da li ji - mo si grei tis di di na jø skai èiø, t. y. lim - fo ci tø kie ká, ku rie ga lë tø tu rë ti CD70 sa vo pa vir ðiu je, kad ska tin tø Treg làs te liø su si da ry mà. To dël bû ti na ið - tir ti imu no sup re si nës ap lin kos skir - tu mus li go niams, ser gan tiems di de lës ap im ties (bulky) li ga, ir tiems, ku riø lim fo ci tø da li ji mo si grei tis yra di de - lis. GYDYMO STRATEGIJOS Treg LÀS TE LIØ SKAIÈIUI SU MA ÞIN TI Visi ðie tyrimai bûtø beverèiai, jeigu jø ne bû tø ga li ma pa nau do ti tin ka mos imu no mo du lia ci nës te ra pi jos pa ieð - kai. CLL gydymas pastaraisiais de - ðimtmeèiais buvo nukreiptas á vëþiniø làsteliø naikinimà. CLL ligoniams taikomi ávairûs gydymo protokolai: alki - linantys preparatai (chlorambucilis ar ciklofosfamidas), daþnai derinami su ki tais vais tais (CHOP, CAP de ri niai); purinø analogai (fludarabinas, klada - rabinas ar pentostatinas), vienas po - pu lia riau siø vais tø flu da ra bi nas, veikiantis nuo p53 priklausomu bûdu [74]; mo nok lo ni niai an ti kû nai (ri tuk - simabas anti-cd20 ar alemtuzumabas anti-cd52) [75]; imunomodulia - ciniai vaistai (talidomidas ir jo dari - niai), árodþius teigimà jø poveiká ligos eigai. Dau gy bë so li di niø na vi kø ty ri mø bu vo at lik ta tam, kad bû tø nu sta ty ta Treg lim fo ci tø reikð më vë þio pa to ge - ne zë je ir pa rink ta tin ka miau sia Treg làs te liø skai èiø ma þi nan ti imu no te ra - pi ja. Ban dant Treg lim fo ci tus ma þi - nan èià imu no te ra pi jà, ne blo gø re zul - ta tø pa siek ta pa nau do jus an ti-cd25 mo nok lo ni nius an ti kû nus [76]. De ja, ðis bû das në ra pa kan ka mai efek ty - vus, nes kar tu su Treg lim fo ci tais ga li bû ti pa ða li na mi ak ty vin ti CD4 + ir CD8 + T lim fo ci tai, ku rie taip pat eks - pre suo ja CD25 þy me ná. Be to, su nai - kin tos Treg làs te lës ið kart pa pil do mos nau jo mis. Ke liø ty ri mø re zul ta tai pa - ro dë, jog ga li bû ti efek ty vûs GITR [77], CTLA-4 [78], OX-40 (na vi kø ne - kro zës fak to riaus ðei mos re cep to riø kos ti mu lia ci në mo le ku lë) [79] mo le - ku liø blo ka vi mas, ma þø do ziø che mo - te ra pi ja cik lo fos fa mi du [80]. Vis dël to ðie gy dy mo bû dai su kë lë sun kiø ða lu - ti niø re ak ci jø (au to imu ni nes li gas, cik lo fos fa mi das mie lo sup re si jà). Dël ðiø prie þas èiø moks li nin kai ieð ko ki - to kiø bû dø pa kreip ti imu ni ná ba lan sà nuo su pre si nio link efek to ri nio [81 83]. Ke li ty ri mai áver ti no che mo te ra pi - niø vais tø, ku rie var to ja mi CLL gy dy - ti, po vei ká Treg làs te liø skai èiui. Flu - da ra bi no ty ri mams bu vo skir tos dvi stu di jos. Jø duo me nys prieð ta rin gi. Pir mà ty ri mà at li ko M. Be yer ir kt. (2005). Au to riai ið ty rë flu da ra bi no áta kà Treg lim fo ci tø skai èiaus po ky - èiams. Re zul ta tai pa ro dë, kad flu da - ra bi nas la bai su ma þi no Treg làs te liø skai èiø (p = 0,01). Sta tis tið kai pa ti ki - mas su ma þë ji mas bu vo nu sta ty tas tik tiems li go niams, ku rie pas ku ti næ flu - da ra bi no do zæ ga vo ma þiau kaip prieð 18 më ne siø. Li go niai, ku riems pas ku - ti në flu da ra bi no do zë bu vo pa skir ta dau giau kaip prieð 18 më ne siø, tu rë jo to kius pa èius Treg lim fo ci tø kie kius kaip ir li go niai, ga væ ki tos rû ðies che - mo te ra pi jà ar ið vis ne gy dy ti. Ðio je stu di jo je ið ana li zuo tos trys pa cien tø gru pës. Pir mo je gru pë je bu vo de ðimt CLL ser gan èiø li go niø, ku rie bu vo gy - do mi flu da ra bi nu. An trà gru pæ su da rë að tuo ni CLL ser gan tys li go niai, nie - ka da ne ga væ flu da ra bi no, tre èià gru - pæ 16 svei kø do no rø. Treg lim fo ci tø funk ci nis ty ri mas bu vo at lik tas vi - siems ty ri mo da ly viams. Áver tin ta mið ri lim fo ci ti në re ak ci ja (MLR). Re - zul ta tai pa ro dë, jog li go niø, gy dy tø flu da ra bi nu, Treg làs te lës bu vo ne - funk cio na lios, IFN- kie kis pa di dë jæs, o kon tro li në je gru pë je Treg làs te lës bu vo ak ty vios, IFN- ga my ba su ma þë - ju si. T làs te lës ið dvie jø do no rø krau jo ban di niø bu vo in ku buo ja mos in vi tro su flu da ra bi nu. 70 % Treg lim fo ci tø, in ku buo ja mø su flu da ra bi nu, patyrë apop to zæ, o 70 % kon tro li niø Treg làs - te liø (in ku buo ja mø be flu da ra bi no) ið - ven gë pro gra muo tos làs te liø þû ties. An tro ty ri mo au to riai (M. Jak ir kt., 2009) ga vo kiek ki tus re zul ta tus. Bu - vo ið tir ti ðe ðiø CLL li go niø ir ðe ðiø svei kø do no rø krau jo më gi niai. Ty ri - mai pa ro dë, jog CLL li go niø Treg làs - te lës yra at spa rios apop to zei, su kel tai flu da ra bi no, ros ko vi ti no ir Fas li gan - dø. Antrojo tyrimo rezultatai gali bûti pa aið kin ti ki tø stu di jø re zul ta tais. Fludarabino terapija sukelia nuo p53 priklausomà apoptozæ, kuri vyksta ak - ty vi nant pro apo to zi nes Bcl-2 ðei mos mo le ku les BH-3, pa vyz dþiui, No xa. Jos slopina antiapoptozinius Bcl-2 ðei - mos bal ty mus, to kius kaip Bcl XL ir Bcl-2, kurie blokuoja proapoptozinës mo le ku lës BAX vei ki mà [84]. M. Jac ir kt. (2009) nu sta të, kad No xa ga my ba CLL ligoniø Treg limfocituose yra sumaþëjusi, palyginti su sveikais donorais. Ga li bû ti, kad bû tent ðis su ma þë - jimas ir lemia Treg làsteliø, iðskirtø ið CLL ligoniø, atsparumà fludarabino te ra pi jai. Taip pat ðis fak tas ga li pa - aið kin ti ir eks pe ri men tà, at lik tà M. Be yer ir kt. (2005) su svei kø do no - rø Treg lim fo ci tais, ku rio me tu nu sta - tytas jautrumas fludarabinui. Taigi, didesni Noxa kiekiai gali lemti didesná Treg limfocitø jautrumà fludarabino terapijai. Roskovitinas yra vaistas, sukelian - tis an ti apop to zi nës Mcl-1 mo le ku lës skilimà dalyvaujant Noxa baltymui. Nors Treg làstelëse Mcl-1 molekulës kiekiai, palyginti su sveikais donorais, buvo nepakitæ, taèiau ðie limfocitai bu - vo atsparûs roskovitino terapijai. Ðis atsparumas taip pat gali bûti paaið - kintas santykinai maþesniu Noxa mo - le ku liø kie kiu [64]. Ádo mu tai, kad CLL ligoniø Treg limfocitø pavirðiuje buvo nustatyta padidëjusi Fas/CD95 ekspresija, taèiau Treg làstelës buvo atsparios vaistams, veikiantiems per Fas re cep to riø. D. V. Dol fi ir kt m. áro dë, jog CD27 sti mu lia ci jos trûkumas sukelia nuo Fas priklauso - mà apoptozæ. CD27 stimuliacija yra padidëjusi CLL ligoniams, todël Treg limfocitai gali bûti atsparûs Fas sukel - tai apop to zei. Vis dël to abie juo se straipsniuose skelbiami duomenys ið - tyrus maþai ligoniø, todël bûtini toles - ni tyrimai ðiai teorijai patikrinti. Rei - kia suprasti, ar ðis atsparumas yra ágy tas dël CD70 CD27 sà vei kos, nes tai gali suteikti naujø gydymo galimy - biø. Re mian tis hi po te zë mis, ið kel to mis ðio je ap þval go je, ke li gy dy mo bû dai yra ver ti dë me sio. Pir miau sia Treg for ma vi ma sis ga li bû ti uþ blo kuo tas nu krei piant imu ni nës sis te mos ba lan LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48)

7 Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija sà ci to tok si nio imu ni te to link. Ðis fe - no me nas ga li bû ti su kel tas var to jant skir tin gus vais tus. At ro dy tø leng - viau sias bû das yra tie sio giai uþ blo - kuo ti CD70 CD27 sig na lo per da vi mo ke lià. Ta èiau ðis bû das sy kiu ga li su - ma þin ti ir ci to tok si niø T lim fo ci tø for - ma vi mà si, taip dar la biau su sil pnin - da mas an ti na vi ki ná at sa kà. To dël ver - ta pa svars ty ti apie vais tus, vei kian - èius per TGF- ir IL-12 ci to ki nus ir su ke lian èius imu ni nës sis te mos po - slin ká nuo Treg lim fo ci tø for ma vi mo si link ci to tok si nio imu ni te to. Rei kia ið - tir ti che mo te ra pi nius vais tus, ku rie ma þi na TGF- kie ká ir po vei ká bei ska - ti na IL-12 ga my bà. Pas ta rai siais me - tais bu vo pa siû ly ta nau jø vais tø TGF- inak ty vin ti, pa vyz dþiui, anti - sense TGF- oli go nuk le o ti dai, an ti- TGF- neut ra li zuo jan tys an ti kû nai, TGF- re cep to riø in hi bi to riai [86]. Ðie vais tai ga li bû ti de ri na mi su IL-12 kie ká di di nan èia che mo te ra pi ja, pa - vyz dþiui, den dri ti niø làs te liø vak ci - na ci ja [83] ar gy dy mu ta li do mi du ir jo ana lo gais. Ke liø straips niø duo me ni - mis, gy dy mas ta li do mi du ska ti na IL-12 sek re ci jà [87, 88]. Be to, ty ri mai su ta li do mi do ana lo gais pa ro dë, jog ðie vais tai ge ba su ma þin ti an ti apop to - zi nio bal ty mo Bcl-2 ga my bà ir taip ak - ty vin ti apop to zæ [89]. Vie no je ið stu di - jø bu vo ti ria mi tri jø CLL ser gan èiø li - go niø krau jo më gi niai dël imu ni niø làs te liø skai èiaus po ky èiø gy dant le - na li do mi du [90]. Ty ri mas pa ro dë le - na li do mi do ge bë ji mà ak ty vin ti NK làs te les ir T lim fo ci tus, ðis ak ty vi ni - mas ga li bû ti su kel tas pa di dë ju sios IL-12 ga my bos [87, 88]. To kios pa ki tu - sios imu ni nës sa vy bës ga li ska tin ti Treg lim fo ci tø apop to zæ. Ki ta stu di ja áro dë ta li do mi do ar le na li do mi do de ri - nio su flu da ra bi nu efek ty vu mà ma þi - nant Treg làs te liø skai èiø ir sti mu - liuo jant efek to ri næ imu ni te to at ða kà [45]. Ðis po vei kis ga li bû ti pa siek tas dël vais tø ge bë ji mo blo kuo ti an ti apop - to zi nius bal ty mus ir di din ti IL-12 ga - my bà. Ki tas bû das pa di din ti an ti na vi - ki ná imu ni te tà yra den dri ti niø làs te - liø vak ci na ci ja, ku ri su ke lia NK ir T lim fo ci tø pro li fe ra ci jà [82, 91, 92]. Den dri ti niø làs te liø vak ci na ci ja CLL li go niams didina IL-12 ga my bà [83]. Ðio gy dy mo efek ty vu mas ke lia abe jo - niø. Ma no ma, kad den dri ti niø làs te - liø vak ci na ci ja ska ti na ci to tok si ná imu ni te tà prieð na vi ko làs te les. Ta - èiau CLL li go niams imu no sup re si niø ci to ki nø ga my ba (TGF- ar IL-10) yra pa di dë ju si, taip pat eg zis tuo ja ir CD70 CD27 kos ti mu lia ci ja, to dël vak ci na vi mas an ti ge nà pa tei kian èio - mis làs te lë mis ga li su kel ti Treg làs te - liø pro li fe ra ci jà ir dar la biau su stip - rin ti imu no sup re si ná fo nà. Taigi den - dri ti niø làs te liø vak ci na ci ja tu rë tø bû ti nuo dug niai ið tir ta. Taip pat tu ri bû ti ið nag ri në ti ðios te ra pi jos re zul ta - tai gy dant li go nius, ku riø imu ni në sis te ma pa si þy mi su pre si në mis ir ci to - tok si në mis sa vy bë mis. Èia ga lë tø pa - dë ti imu ni nës sis te mos ver ti ni mas: imu no sup re si nës gran dies TGF- ar IL-10 kie kio krau jy je nustatymà, o su - si for ma vu siam efek to ri nës gran dies imu ni te tui ávertinti ga lë tø bû ti pra - var tus an ti ge no ir tet ra me ro kom - plek sø ty ri mas. Gy dy mas ga li bû ti nu kreip tas ir á an ti apop to zi niø Bcl-2, IAP, Mcl-1 bal ty mø kie kio ma þi ni mà ar á Bax ski li mo in hi bi ci jà (oba toc lax, bor te zo mib), taip pat ga li ma var to ti BH-3 mi me ti kus, pa vyz dþiui, gossypol, ABT-737 [93 96]. Vi si ðie vais tai su ke lia vë þi niø làs te liø apop - to zæ. Tai gi bû tø ádo mu pa tik rin ti, kaip jie vei kia Treg lim fo ci tø skai èiø. IÐVADOS Nepaisant gausiø Treg làsteliø tyri - mø, yra tik ke li, ku rie nag ri në ja Treg lim fo ci tø for ma vi mà si ser gant CLL. Treg làs te liø for ma vi ma sis per CD70 CD27 receptoriø stimuliacijà ir ðio proceso átaka padidëjusiam anti - apoptoziniø baltymø kiekiui turi bûti ti ria ma nuo dug niau. Svar bu su pras ti, ar gy dy mas imu no mo du lia ci niais vaistais, monokloniniais antikûnais ir den dri ti niø làs te liø vak ci na ci ja ga li sumaþinti CD4 + reguliaciniø T làsteliø kie ká ir ar tai kli nið kai reikð min ga CLL ei gai. Prieð gy dant to kiais me to - dais kaip dendritiniø làsteliø vakcinacija bûtina ávertinti ligonio imuninæ bûklæ (TGF-, IL-10 kieká, reaktyvu - mà an ti ge no ir tet ra me ro kom plek - sams), kad su pras tu me, ar ðis gy dy - mas bus veiksmingas. Minëti tyrimai su da ry tø prie lai dà in di vi du a liai pa - rinkti vakcinacijà, o tai pagerintø CLL gy dy mo re zul ta tus. Gauta: Priimta spaudai: Summary T REGULATORY CELL DEVELOPEMENT AND APOPTOSIS IN B-CELL CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA PATIENTS Jelena Blaðèiuk, Rëda Matuzevièienë Can cer im mu nol ogy is one of the most pop u lar can cer re search fields. In - creased at ten tion to this field was prompted by ev i dence that tu mour cells are able to in duce immunosuppression in tu mour bear ing host. The prob lem of tu mour in duced immunosuppression is overviewed as well as short his tory of cancer immunology research. We dis - cuss about the pos si ble mech a nisms of T reg u la tory (Treg) cells in duced immunosuppression and its in flu ence on prog no sis of dis ease. Ob vi ously, CD4+ T regulatory lymphocytes play the key role in this tu mour caused immunosuppression. Numerous stud - ies were per formed with dif fer ent types of solid tu mours as well as with haema - tological malignancies. The focus of at - ten tion is on al ter ations of Treg cells num ber in B cell chronic lymphocytic leukemia (CLL) patients. The possible ways of Treg cell hy per-for ma tion via CD70 CD27 co-stim u la tion and an in - flu ence of this for ma tion man ner on changed apoptotic Treg pro file are overviewed. The im por tance of Bcl fam - ily anti-apoptotic pro teins in fludarabine re sis tance of Treg lym pho - cytes is men tioned. We dis cuss the pos - si bil i ties of treat ment with tha lid o mide and its analogs, chemotherapeutical drugs which re duce the level of trans - form ing growth fac tor (TGF- ) or treat - ment with Bcl fam ily anti-apoptotic pro teins in hib i tors. All these pos si bil i - ties might be ef fec tive al ter na tive for fludarabine ther apy. The ar ti cle gives over view of den dritic cell vac ci na tion and re lated prob lems as well. Keywords: Treg cells, B cell chronic lymphocytic leu ke mia, Bcl fam ily pro - teins, fludarabine, tha lid o mide and tha lid o mide de riv a tives, den dritic cells vaccination. LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48) 225

8 Jelena Blaðèiuk, Rëda Matuzevièienë LITERATÛRA Baldwin RW. Tumour-associated anti - gens and tu mour-host in ter ac tions. Proc R Soc Med 1971; 64(10): Feizi T. Car bo hy drate an ti gens in hu - man can cer. Can cer Surv 1985; 4(1): Adinolfi M, Lessof MH. Can cer, onco - genes and oncofetal an ti gens. Q J Med 1985; 54(215): Smets LA. Cell trans for ma tion as a model for tu mor in duc tion and neo plas - tic growth. Biochim Biophys Acta 1980; 605(1): Yaqub S. Aandahl EM. In flam ma tion ver sus adap tive im mu nity in can cer pathogenesis. Crit Rev Oncog 2009; 15(1 2): Sakaguchi S, Sakaguchi N, Asano M, Itoh M, Toda M. Im mu no logic self-tol - er ance main tained by ac ti vated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25): break down of a sin gle mech a - nism of self-tol er ance causes var i ous au to im mune dis eases. J Immunol 1995; 155: Maloy KJ, Powrie F. Reg u la tory T cells in the con trol of im mune pa thol ogy. Nat Immunol 2001; 2: Miura Y, Thoburn ChJ, Bright EC, Phelps MC, Shin T, Matsui EC, et al. Reg u la tory T cells in the con trol of im - mune pa thol ogy. Nat Immunol 2001; 2: Sakaguchi S. Nat u rally aris ing CD4 + reg u la tory T cells for im mu no - logic self-tol er ance and neg a tive con - trol of im mune re sponses. Annu Rev Immunol 2004; 22: Zorn E, Kim HT, Lee SJ, Floyd BH, Litsa D, Arumugarajah S, et al. Re - duced fre quency of FOXP3 + CD4 + CD25 + reg u la tory T cells in pa tients with chronic graft-ver sus-host dis ease. Blood 2005; 106: Dores GM, An der son WF, Curtis RE, Landgren O, Ostroumova E, Bluhm EC, et al. Chronic lymphocytic leu kae mia and small lymphocytic lym - phoma: over view of the de scrip tive ep i - de mi ol ogy. Br J Haematol 2007; 139: Jemal A, Siegel R, Ward E, Murray T, Xu J, Smigal C, et al. Can cer sta tis tics. CA Can cer J Clin 2006; 56: Jor dan MS, Boesteanu A, Reed AJ, Petrone AL, Holenbeck AE, Lerman MA, et al. Thymic se lec tion of CD4 + CD25 + reg u la tory T cells in duced by an ag o nist self-pep tide. Nat Immunol 2001; 2: Stephens LA, Ma son D. CD25 is a marker for CD4 + thymocytes that pre - vent autoimmune diabetes in rats, but pe riph eral T cells with this func tion are found in both CD25 + and CD25 sub - populations. J Immunol 2000; 165: Stephens LA, Mottet C, Ma son D, Powrie F. Hu man CD4(+)CD25(+) thymocytes and pe riph eral T cells have immune suppressive activity in vitro. Eur J Immunol 2001; 31: Barrat FJ, Cua DJ, Boonstra A, Rich - ards DF, Crain C, Savelkoul HF, et al. In vi tro gen er a tion of interleukin 10- producing regulatory CD4 + T cells is in - duced by immunosuppressive drugs and in hib ited by T helper type 1 (Th1)- and Th2-in duc ing cytokines. J Exp Med 2002; 195: Kemper C, Chan AC, Green JM, Brett KA, Murphy KM, Atkinson JP. Ac ti va tion of hu man CD4_ cells with CD3 and CD46 in duces a T-reg u la tory cell 1 phe no type. Na ture 2003; 421: Golgher D, Jones E, Powrie F, Elliott T, Gallimore A. De ple tion of CD25+ reg u - la tory cells un cov ers im mune re - sponses to shared murine tu mor re jec - tion an ti gens. Eur J Immunol 2002; 32(11): Woo EY, Chu CS, Goletz TJ, Schlienger K, Yeh H, Coukos G. Reg u - la tory CD4(+)CD25(+) T cells in tu mors from pa tients with early-stage nonsmall cell lung can cer and late-stage ovar ian can cer. Can cer Res 2001; 61(12): Fontenot JD, Gavin MA, Rudensky AY. Foxp3 pro grams the de vel op ment and function of CD4+CD25+ regulatory T cells. Na ture Immunol 2003; 4: Vinodh P, Ortega SB, Wang K, Karandikar NJ. Tran sient reg u la tory T-cells: a state at tained by all ac ti vated hu man T-cells. Clin Immunol 2008; 123(1): Liu W, Putnam AL, Xu-yu Z, Szot GL, Lee MR, Zhu S, et al. CD127 ex pres sion in versely cor re lates with FoxP3 and suppressive function of human CD4+ T reg cells. J Exp Med 2006; 203(7): Epub 2006 Jul Liyanage UK, Moore TT, Joo HG, Tanaka Y, Herrmann V, Doherty G, Drebin JA, Strasberg SM, Eberlein TJ, Goedegebuure PS, Linehan DC. Prev a - lence of reg u la tory T cells is in creased in pe riph eral blood and tu mor micro - environment of pa tients with pan creas or breast adenocarcinoma. J Immunol 2002; 169(5): Sasada T, Kimura M, Yoshida Y, Kanai M, Takabayashi A. CD4+CD25+ reg u la tory T cells in pa tients with gas - tro in tes ti nal ma lig nan cies: pos si ble in - volve ment of reg u la tory T cells in dis - ease pro gres sion. Can cer 2003; 98(5): Petersen RP, Campa MJ, Sperlazza J, Conlon D, Joshi MB, Harpole DH, et al. Tumor infiltrating Foxp3+ regulatory T-cells are associated with recurrence in patho logic stage I NSCLC pa tients. Can cer 2006; 107: Shimizu K, Nakata M, Hirami Y, Yukawa T, Maeda A, Tanemoto K. Tu - mor-in fil trat ing Foxp3+ reg u la tory T cells are cor re lated with cyclo oxyge - nase-2 ex pres sion and are as so ci ated with re cur rence in resected non-small cell lung can cer. J Thorac Oncol 2010; 5(5): Curiel TJ, Coukos G, Zou L, Alvarez X, Cheng P, Mottram P, Evdemon- Ho - gan M, et al. Spe cific re cruit ment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts re duced sur vival. Nat Med 2004; 10: Gao Q, Qiu SJ, Fan J, Zhou J, Wang XY, Xiao YS, et al. Intratumoral bal ance of reg u la tory and cytotoxic T cells is as so ci ated with prog no sis of hepatocellular carcinoma after resec - tion. J Clin Oncol 2007; 25: Mizukami Y, Kono K, Kawaguchi Y, Akaike H, Kamimura K, Sugai H, et al. Lo cal isa tion pat tern of Foxp3+ reg u la - tory T cells is as so ci ated with clin i cal be hav iour in gas tric can cer. Br J Can - cer 2008; 98: Shen Z, Zhou S, Wang Y, Li RL, Zhong C, Liang C, et al. Higher intratumoral in fil trated Foxp3+ Treg num bers and Foxp3+/CD8+ ra tio are as so ci ated with ad verse prog no sis in resectable gas tric can cer. J Can cer Res Clin Oncol 2010; 136(10): Badoual C, Hans S, Ro dri guez J, Peyrard S, Klein Ch, Agueznay NR, et al. Prognostic value of tumor-infiltrat - ing CD4+ T-cell subpopulations in head and neck can cers. Clin Can cer Res 2006; 12: Salama P, Phillips M, Grieu F, Morris M, Zeps N, Jo seph D, et al. Tumorinfiltrating FOXP3+ T reg u la - tory cells show strong prog nos tic sig nif - i cance in colorectal can cer. J Clin Oncol 2009; 27: Carreras J, Lopez-Guillermo A, Fox BC, Colomo L, Mar ti nez A, Ronca - dor G, et al. High num bers of tu mor- in - fil trat ing FOXP3-pos i tive reg u la tory T cells are as so ci ated with im proved over all sur vival in follicular lym phoma. Blood 2006; 108(9): Lee NR, Song EK, Jang KY, Choi HN, Moon SW, Kwon K, et al. Prog nos tic im pact of tu mor in fil trat ing FOXP3 pos i tive reg u la tory T cells in dif fuse large B-cell lym phoma at di ag no sis. Leu ke mia & Lym phoma 2008; 49(2): Fox SB, Launchbury R, Bates GJ, Han C, Shaida N, Malone PR, et al. The num ber of reg u la tory T cells in pros tate can cer is as so ci ated with the an dro gen receptor and hypoxia-inducible factor (HIF)-2alpha but not HIF-1alpha. Pros tate 2007; 67: Grabenbauerl GG, Lahmer G, Distel, Niedobitek G. Tu mor-in fil trat ing cyto - toxic T cells but not reg u la tory T cells pre dict out come in anal squamous cell car ci noma. Clin Can cer Res 2006; 12: Camus M, Tosolini M, Mlecnik B, Pagès F, Kirilovsky A, Berger A, et al. Coordination of intratumoral immune re ac tion and hu man colorectal can cer 226 LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48)

9 Reguliaciniø T làsteliø formavimosi ir apoptozës ypatumai sergant lëtine B limfocitø limfoleukemija re cur rence. Can cer Res 2009; 69: Binet J-L,Cappio FC, Catovsky D, Cheson B, Da vis T, Dighiero G, Dohner H, et al. Per spec tives on the use of new di ag nos tic tools in the treat - ment of chronic lymphocytic leu ke mia. Blood 2006; 107: Cheson BD, Bennett JM, Grever M, Kay N, Keating MJ, O Brien S, et al. Na tional Can cer In sti tute-spon sored Work ing Group guide lines for chronic lymphocytic leu ke mia: re vised guide - lines for di ag no sis and treat ment. Blood 1996; 87: Rai KR, Sawitsky A, Cronkite EP, Chanana AD, Levy RN, Pasternack BS. Clin i cal stag ing of chronic lymphocytic leu ke mia. Blood 1975; 46: Binet JL, Leporrier M, Dighiero G, Charron D, Vaugier G, Beral H, et al. A clin i cal stag ing sys tem for chronic lymphocytic leu ke mia. Can cer 1977; 40: Beyer M, Kochanek M, Darabi K, Popov A, Jensen M, Endl E, et al. Re - duced fre quen cies and sup pres sive func tion of CD4_CD25hi reg u la tory T cells in pa tients with chronic lymphocytic leu ke mia af ter ther apy with fludarabine. Blood 2005; 106(6). 44. Giannopoulus K, Schmitt M, Wlasiuk P, Chen J, Bojarska-Junak A, Kowal M. et al. The high fre quency of T regulatory cells in pa tients with B-cell chronic lymphocytic leu ke mia is di min ished through treat ment with tha lid o mide. Leu ke mia 2008; 22: 222 4; doi: /sj.leu Giannopoulus K, Schmitt M, Kowal M, Wlasiuk P, Bojarska-Junak A, Chen J, et al. Char ac ter iza tion of reg u la tory T cells in pa tients with B-cell chronic lymphocytic leu ke mia. On col ogy Re - ports 2008; 20: Jak M, Mous R, Remmerswaal E, Spijker R, Jaspers A, Yagüe A, et al. En hanced for ma tion and sur vival of CD4 + CD25 high Foxp3 T-cells in chronic lymphocytic leu ke mia. Leu ke mia & Lym phoma 2009; 50(5): Jonuleit H, Schmitt E. The reg u la tory T cell fam ily: dis tinct sub sets and their interrelations. The Journal of Immu - nol ogy 2003; 171: Djurdjevic P, Zelen I, Ristic P, Baskic D, Popovic S, Arsenijevic N, et al. Role of de creased pro duc tion of interleukin-10 and in ter feron-gamma in spon ta ne ous apoptosis of B-chronic lymphocytic leu ke mia lym pho cytes in vi tro. Ar chives of Med i cal Re search 2009; 40: 357e 63e. 49. Lagneaux L, Delforge A, Dorval C, Bron D, Stryckmans P. Ex ces sive pro - duc tion of trans form ing growth fac tor- by bone mar row stromal cells in B-cell chronic lymphocytic leu ke mia in hib its growth of hematopoietic pre cur sors and interleukin-6 pro duc tion. Blood 1993; 82(8): Kremer JP, Reisbach G, Nerl C, Dörmer P. B-cell chronic lymphocytic leu kae mia cells ex press and re lease trans form ing growth fac tor-. BJH 1992; 80: Menetrier-Caux Ch, Gobert M, Caux C. Differences in tumor regulatory T-cell lo cal iza tion and ac ti va tion sta tus im - pact pa tient out come. Can cer Res 2009; 69(20). 52. Dercamp Ch, Chemin K, Caux Ch, Trinchieriand G, Vicari AP. Dis tinct and over lap ping roles of interleukin-10 and CD25 + reg u la tory T cells in the in - hi bi tion of antitumor CD8 T-cell re - sponses. Can cer Re search 2005; 65: Ghiringhelli F, Puig PE, Roux S, Parcellier A, Schmitt E, Solary E, et al. Tumor cells convert immature myeloid den dritic cells into TGF- -se cret ing cells inducing CD4+CD25+ regulatory T cell pro lif er a tion. JEM 2005; 202: Melani C, Chiodoni C, Forni G, Co - lombo MP. Myeloid cell ex pan sion elic - ited by the pro gres sion of spon ta ne ous mam mary car ci no mas in c-erbb-2 trans gen ic BALB/c mice sup presses im mune re ac tiv ity. Blood 2003; 102(6): Serra P, Amrani A, Yamanouchi J, Han B, Thiessen S, Utsugi T, et al. CD40 li ga tion re leases im ma ture den - dritic cells from the con trol of reg u la - tory CD4+CD25+ T cells. Im mu nity 2003; 19(6): Fallarino F, Grohmann U, You S, McGrath B, Cavener DR, Vacca C, et al. The com bined ef fects of tryptophan star va tion and tryptophan catabolites down-reg u late T cell re cep tor -chain and induce a regulatory phenotype in na ive T cells. Im mu nol ogy 2008; 180: Munn DH, Sharma MD, Hou D, Baban B, Lee JR, Antonia SJ, et al. Ex - pres sion of indoleamine 2,3-dioxy - genase by plasmacytoid den dritic cells in tu mor-drain ing lymphnodes. J Clin In vest 2004; 114: Munn DH. Indoleamine 2,3-dioxy - genase, tumor-induced tolerance and coun ter- reg u la tion. Curr Opin Immunol 2006; 18: Cosman D. A fam ily of lig ands for the TNF re cep tor superfamily. Stem Cells 1994; 12: Oosterwijk MF, Juwana H, Arens R, Tesselaar K, Oers MH, Eldering E, et al. CD27 CD70 in ter ac tions sensi tise na ive CD4 + T cells for IL-12-in duced T h 1 cell de vel op ment. In ter na tional Im mu nol ogy 2007; 19(6): Zheng Z, Takahashi M, Aoki S, Toba K, Liu A, Osman Y, et al. Ex pres sion pat - terns of costimulatory mol e cules on cells derived from human hematologi - cal ma lig nan cies. J Exp Clin Can cer Res 1998; 17(3): Yang ZZ, Novak AJ, Ziesmer SC, Witzig TE, Ansell SM. CD70 + non- Hodg kin lym phoma B cells in duce Foxp3 ex pres sion and reg u la tory func - tion in intratumoral CD4 + CD25 + T cells. Blood 2007; 110: Mittal S, Mar shall NA, Duncan L, Culligan DJ, Barker RN, Vickers MA. Lo cal and sys temic in duc tion of CD4 + CD25 + reg u la tory T-cell pop u la tion by non-hodg kin lym phoma. Blood 2008; 111: Smit LA, Hallaert DY, Spijker R, de Goeij B, Jaspers A, Kater AP, et al. Dif - fer en tial Noxa/Mcl-1 bal ance in pe riph - eral ver sus lymph node chronic lympho cytic leu ke mia cells cor re lates with sur vival ca pac ity. Blood 2007; 109: Kitada S, Zapata JM, Andreeff M, Reed JC. Bryostatin and CD40-ligand en hance apoptosis re sis tance and in - duce ex pres sion of cell sur vival genes in B-cell chronic lymphocytic leu kae mia. BJH 1999; 106: Yip KW, Redd JC. Bcl-2 fam ily pro teins and can cer. Onco gene 2008; 27: Qu Y, Jin S, Zhang A, Zhang B, Shi X, Wang J, et al. Gamma-ray re sis tance of reg u la tory CD4 + CD25 + Foxp3 + T cells in mice. Ra di a tion Re search 2010; 173: Schiemann WP, Rotzer D, Pfeifer WM, Levi E, Rai KR, Knaus P, et al. Trans - form ing growth fac tor-beta (TGFbeta)- re sis tant B cells from chronic lymphocytic leu ke mia pa tients con tain recurrent mutations in the signal se - quence of the type I TGF-beta re cep tor. Can cer De tect Prev 2004; 28(1): Law CH, Gordon KA, Toki BE, Yamane AK, Hering MA, Cerveny ChG, et al. Lym pho cyte ac ti - va tion an ti gen CD70 ex pressed by re - nal cell car ci noma is a po ten tial ther a - peu tic tar get for anti-cd70 an ti bodydrug con ju gates. Can cer Res 2006; 66(4). 70. Diegmann J, Junker K, Loncarevicz IF, Michel S, Schimmel B, von Eggeling F. Im mune es cape for re nal cell car ci - noma: CD70 me di ates apoptosis in lym - pho cytes. Neo pla sia 2006; 8(11): Chahlavi A, Rayman P, Rich mond AL, Biswas K, Zhang R, Vogelbaum M. et al. Glioblastomas in duce T-lym pho cyte death by two dis tinct path ways in volv - ing gangliosides and CD70. Can cer Res 2005; 65(12). 72. Grossman WJ, Verbsky JW, Barchet W, Colonna M, Atkinson JP, Ley TJ. Hu man T reg u la tory cells can use the perforin path way to cause autologous tar get cell death. Im mu nity 2004; 21: Zhao DM, Thorn ton AM, DiPaolo RJ, Shevach EM. Ac ti vated CD4 + CD25 + T cells se lec tively kill B lym pho cytes. Blood 2006; 107(10). 74. Willhelm K, Yang D. A re view of phar - ma co logic op tions for pre vi ously un - treated chronic lymphocytic leu ke mia. LABORATORINË MEDICINA 2010, t. 12, Nr. 4(48) 227